24778.myox與ncadherin相互作用影響促性腺激素釋放激素神經(jīng)元的遷移

1、學校代碼：巡分類號：盟研究生學號：10200200821536密級：玉東牡知予冠大雪碩士學位論文MyoX與N—Cadherin相互作用影響促性腺激素釋放激素神經(jīng)元的遷移GnRHmigrationisinfluencedbytheinteractionofMyoXandNCadherin作者：苑琳指導教師：學科專業(yè)：研究方向：學位類型：朱筱娟教授遺傳學神經(jīng)細胞遷移學歷碩士東北師范大學學位評定委員會2011年6月摘要促性腺激素釋放性激素(G

2、onadotropinreleasing—hormone，GnRH)神經(jīng)細胞起源于鼻間隔嗅基板區(qū)域，沿著犁鼻神經(jīng)纖維遷移到篩板，然后穿過篩板繞過嗅球，最終遷移至前腦部位分泌GnRH激素。這種激素是生殖軸重要的腦部調(diào)節(jié)因子，在調(diào)節(jié)垂體。|生腺軸的功能中發(fā)揮著很關(guān)鍵的作用。因此GnRH神經(jīng)細胞遷移至正確位置，對脊椎動物生殖系統(tǒng)的發(fā)育及生殖功能的發(fā)揮非常重要。MyoX(MyosinX)分子作為一種非傳統(tǒng)形式的肌球蛋白，在絲足形成、細胞遷移、細

3、胞粘附及極性建立等過程中都發(fā)揮著重要作用。實驗室前期工作已經(jīng)證明沉默MyoX的表達會引起細胞極性的喪失。已有研究表明MyoX通過FERM結(jié)構(gòu)域與血管內(nèi)皮細胞鈣粘附蛋白(VE—Cadherin)相互作用，攜帶VECadherin沿著絲足運動，從而促進早期細胞間連接的建立。NCadherin是跨膜糖蛋白的鈣粘素家族的重要成員之一，與VE—Cadherin具有高度的同源性。NCadherin是表達于神經(jīng)系統(tǒng)的鈣粘附蛋白，推測NCadherin

4、可能具有與VE—Cadherin相似的功能，通過與MyoX相互作用，在神經(jīng)細胞粘附形成和極性建立中發(fā)揮著重要作用。實驗中通過免疫共沉淀證明MyoX可通過尾部區(qū)與NCadherin相互作用；然后沉默MyoX在NLT細胞系中的表達，導致細胞粘著斑密度由0097士000021個／岬：降低密度為0052士000017個／!arn2；利用‘stickandwash’方法也檢測到細胞與基質(zhì)問粘附能力降低；同時Factin的密度也由000434000

5、012個／，tm2降低為00027士000015個／um2，說明細胞骨架的穩(wěn)定性受到影響；通過RealtimePCR分析發(fā)現(xiàn)，沉默MyoX導致NCadherin的轉(zhuǎn)錄水平下降為正常水平的5240％，Westernblot分析表明蛋白表達也受到抑制；細胞團分析表明，正常情況下，細胞團周圍細胞遷移總數(shù)和輻射狀遷移細胞數(shù)目分別為117土205841個和115士204134個，而MyoX沉默后，遷移總數(shù)和輻射狀遷移細胞分別降為94土136651

6、個和90士133416個，NCadherin的過表達又分別使之提高為1114143858個和109士145428個；同時MyoX也影響細胞遷移距離，沉默MyoX使細胞團周圍細胞的平均遷移距離由正常水平的158士15701llxm降低為109士361012肛m，而過表達NCadherin使細胞平均遷移距離恢復為170士103982pm。總之，結(jié)果表明MyoX與NCadherin相互作用，調(diào)節(jié)GnRH神經(jīng)細胞的正確遷移，為進一步闡明GnRH