24241.d泛解酸內酯水解酶的固定化研究

1、分類號：TQ93密級：(秘密機密絕密)學校代碼：10057研究生學號：08812535D一泛解酸內酯水解酶的固定化研究StudyonImmobilizationolDlactonohydrolase專業(yè)名稱：微牛物與生化藥學(理)指導教師姓名：黎明副教授研究生姓名：張建中申請學位級別：理學碩士論文提交H期：2011年3月論文課題米源：省部級專項課題學位授予單位：天津科技大學摘要D泛解酸內酯水解酶可以專一牲拆分DL泛解酸如酯，生成D一泛解

2、酸。D一泛解酸是合成合成維生素類藥物D泛醇及神經(jīng)營養(yǎng)藥D一泛酸鈣的前體。本文以本實驗室篩選的高產D泛解酸內酯水解酶的菌株腐皮鐮孢菌(FusariumproliferatumvaFproliferatumAS34738)為材料發(fā)酵產菌絲體，研究了從菌絲體提取D一泛解酸內酯水解酶以及固定化該酶的方法，明確了固定化酶的酶學性質并對固定化酶的轉化工藝條件進行了優(yōu)化，從而為該酶的工業(yè)化應用奠定了基礎。實驗用液氮研磨法、高壓均質法和超聲破碎法對菌絲

3、體進行破壁處理，結果顯示三種方法處理所得的酶活提取率分別為：5758％，5697％和5378％。然后進行超濾濃縮，粗酶液由0013U／mL提高到O04UtmL，酶活損失率為35％。實驗選用了6種有代表性的樹脂D3520、D一152、D一380、N—KA9、AB一8和ESV1進行研究。通過實驗發(fā)現(xiàn)D一380吸附D一泛解酸內酌水解酶的效果最好。用它固定化酶，酶活可達4U／g樹脂，酶活回收率達到667％。通過比較戊二醛和THP的交聯(lián)效果，發(fā)現(xiàn)

4、戊二醛的交聯(lián)效果優(yōu)于THP。使用日訂者的圊定化酶活是后者的476倍。優(yōu)化的戊二醛固定化條件為：加酶量為6U／g樹脂，吸附DH75，吸附溫度30。C，吸附時I訓4h；戊二醛(終)濃度01％，交聯(lián)時問lh，變聯(lián)溫度4℃。采用單因素的實驗方法確定了固定化酶的酶學性質：固定化D泛解酸內酯水解酶最適溫度40。C，比游離酶提高了10。C；其熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性均有定的提高；固定化酶動力學常數(shù)K。為28。2mmol／L，比報道的D一泛解酸內酯水解酶的