產(chǎn)γ-內(nèi)酰胺水解酶菌株的固定化及在手性藥物合成中的應(yīng)用.pdf

1、(-)γ-內(nèi)酰胺是合成治療艾滋病新藥阿巴卡韋(abacavir)的重要中間體。與化學(xué)催化劑相比，固定化細胞生物催化劑不僅具有很高的立體選擇性，并且可以重復(fù)利用。因此，利用固定化細胞進行(士)γ-內(nèi)酰胺的手性拆分，具有廣泛的應(yīng)用前景。
　　 本課題以已篩選得到的產(chǎn)γ-內(nèi)酰胺水解酶的菌株Microbacteriumhydrocarbonoxydans L29-9為實驗菌株，以固定化細胞的機械強度、酶活力(產(chǎn)物(-)γ-內(nèi)酰胺收率)和

2、立體選擇性(e.e.值)作為主要考察指標(biāo)對固定化細胞進行研究。
　　 優(yōu)化了固定化細胞的制備條件：以6％聚乙烯醇和1％海藻酸鈉作為復(fù)合載體材料，在3％硼酸中添加2％氯化鈣(pH6.7)作為交聯(lián)劑，以1 mL175 mg/mL菌懸液制備一份固定化細胞，固定化細胞凝膠珠體靜止浸泡在交聯(lián)劑中置于4℃下進行硬化處理1 h，即得一份固定化細胞。
　　 優(yōu)化了固定化細胞批次生物轉(zhuǎn)化條件：一份固定化細胞加入到去離子水配制的20 mL1

3、g/Lγ-內(nèi)酰胺溶液(pH7.0)中，搖床震蕩，30℃，220r/min，轉(zhuǎn)化3h。
　　 優(yōu)化了固定化細胞批次生物轉(zhuǎn)化間隔時期的保存條件：一份固定化細胞浸泡在40 mL0.5 mM K+溶液中，置于4℃下冷藏保存。
　　 經(jīng)過一系列優(yōu)化實驗后，進行了固定化細胞生物轉(zhuǎn)化穩(wěn)定性的研究，在最優(yōu)條件下，固定化細胞生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物(-)γ-內(nèi)酰胺收率為34％，e.e.值＞99％，批次轉(zhuǎn)化可進行14次，在9次轉(zhuǎn)化內(nèi)，收率和e.e.值均