MBTH法測(cè)定多糖水解酶活力的研究.pdf

1、多糖水解酶類是自然界中廣泛分布的酶類，幾乎每種生物--動(dòng)物、植物、藻類、細(xì)菌、古細(xì)菌、真菌，甚至噬菌體中都發(fā)現(xiàn)這類酶的存在。已被廣泛應(yīng)用于飼料、食品、醫(yī)藥、能源、造紙、紡織等行業(yè)中，成為各個(gè)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。3－甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)法具有成本低、操作簡單、靈敏度高、精密度好和準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)，近年來已被應(yīng)用于還原糖的含量檢測(cè)。由于MBTH法在測(cè)定還原糖方面還處于研究階段，因此本論文首先將MBTH法與傳統(tǒng)的多糖水解酶活力檢測(cè)方法

2、進(jìn)行比較，并進(jìn)行檢測(cè)條件的優(yōu)化；然后將MBTH法應(yīng)用于木聚糖酶和溶菌酶的活力測(cè)定，建立多糖水解酶活力測(cè)定的新方法。并將其應(yīng)用于海參體壁多糖水解酶的活力測(cè)定，研究多糖水解酶在海參自溶過程中的作用。本論文主要包括以下研究內(nèi)容：
　　 1．對(duì)MBTH法、DNS法和鐵氰化鉀法在還原糖測(cè)定方面進(jìn)行比較研究
　　 用MBTH法、3,5-二硝基水楊酸(DNS)法和鐵氰化鉀法分別測(cè)定了葡萄糖，木糖，巖藻糖，阿拉伯糖，N-乙酰氨基葡萄糖，

3、氨基葡萄糖等六種還原糖，對(duì)測(cè)定結(jié)果的比較分析表明：新方法MBTH法測(cè)還原糖的精密度和回收率與DNS法和鐵氰化鉀法相近；MBTH法測(cè)還原糖的靈敏度最高，鐵氰化鉀法次之，DNS法最低。因此MBTH法特別適合還原糖的微量測(cè)定。
　　 2．建立MBTH法測(cè)定木聚糖酶活力的新方法
　　 對(duì)MBTH法在木聚糖酶活力測(cè)定方面進(jìn)行了研究。首先以木糖為標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)MBTH法測(cè)還原糖的檢測(cè)條件進(jìn)行了研究；其次在最適檢測(cè)條件下測(cè)定木聚糖酶活力，

4、并對(duì)該方法在酶活力測(cè)定中的幾個(gè)關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行了深入研究；最后確定了MBTH法測(cè)定木聚糖酶的最低檢測(cè)限和定量限，并進(jìn)行了方法驗(yàn)證，結(jié)果表明：該方法靈敏度高，準(zhǔn)確度高，結(jié)果穩(wěn)定，適用于木聚糖酶的活力測(cè)定。
　　 3．建立MBTH法測(cè)定溶菌酶活力的新方法
　　 對(duì)MBTH法在溶菌酶活力測(cè)定方面進(jìn)行了研究。首先以N-乙酰氨基葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)MBTH法的檢測(cè)條件進(jìn)行了研究；其次使用半脫乙酰度的殼聚糖為底物，研究了該方法在酶活力測(cè)定

5、中的幾個(gè)關(guān)鍵參數(shù)；最后建立了酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)曲線，確定了動(dòng)力學(xué)參數(shù)，并進(jìn)行了方法驗(yàn)證，結(jié)果表明MBTH法適合于溶菌酶的活力測(cè)定
　　 4．MBTH法在海參體壁多糖水解酶活力測(cè)定中的應(yīng)用研究
　　 對(duì)MBTH法在海參體壁多糖水解酶方面進(jìn)行了研究。首先通過高效液相色譜測(cè)出海參自溶后其體壁多糖含量有所減少，證明海參自溶過程中有多糖水解酶的參與；然后對(duì)海參體壁的自溶酶進(jìn)行提取，分離純化，測(cè)定各收集管酶液的蛋白酶活力，以確定酶活的存在