18529.凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白大亞基變體的研究

1、學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的工作研究及取得的研究成果。論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在論文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。作者簽名：日期：年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人授權(quán)汕頭大學(xué)保存本學(xué)位論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱；學(xué)?？蓪⒈緦W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可

2、以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存和匯編論文；學(xué)?？梢韵驀矣嘘P(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文并授權(quán)其保存、借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。對于保密的論文，按照保密的有關(guān)規(guī)定和程序處理。本論文屬于：保密（），在年內(nèi)解密后適用本授權(quán)聲明。不保密（）。（請?jiān)谝陨侠ㄌ杻?nèi)打“√”）作者簽名：導(dǎo)師簽名：日期：年月日日期：年月日汕頭大學(xué)碩士學(xué)位論文郭玲玲：凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白大亞基變體的研究I摘要對蝦血藍(lán)蛋白是近年來在對蝦等無脊椎動物體內(nèi)新發(fā)現(xiàn)的一種罕

3、見的多功能蛋白，但迄今為止，其功能多樣性的分子機(jī)制尚不是很清楚。可喜的是，本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)對蝦血藍(lán)蛋白在核酸、蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)后修飾等不同水平具有明顯的分子多態(tài)性，其可能是導(dǎo)致血藍(lán)蛋白具有功能多樣性的分子機(jī)制之一，然而這些探索還不夠深入，尤其是我們最近通過生物信息學(xué)研究發(fā)現(xiàn)凡納濱對蝦血藍(lán)蛋白大亞基可能還存在多種變體序列。為此，我們進(jìn)一步對血藍(lán)蛋白大亞基可能存在的變體及其核酸序列、免疫學(xué)功能等進(jìn)行了深入、系統(tǒng)的研究，所獲主要研究結(jié)果如下

4、：1、對蝦血藍(lán)蛋白大亞基變體的預(yù)測、確定及其進(jìn)化關(guān)系分析、對蝦血藍(lán)蛋白大亞基變體的預(yù)測、確定及其進(jìn)化關(guān)系分析依據(jù)南卡羅萊納醫(yī)學(xué)院網(wǎng)站（:www.marinegenomics.gganisms）凡納濱對蝦EST數(shù)據(jù)庫，采用序列比對發(fā)現(xiàn)，2478條對蝦血藍(lán)蛋白大亞基（命名為HcL）EST序列中存在42條與野生型HcL序列同源性為8993%的序列，根據(jù)其核酸序列差異的大小，可分為10種不同的類型。同時(shí)，根據(jù)這些HcLEST氨基酸差異序列高頻出

5、現(xiàn)區(qū)間，設(shè)計(jì)簡并引物，通過PCR擴(kuò)增與測序分析，發(fā)現(xiàn)138條序列中存在5條與野生型HcL堿基差異率為79％的序列。最后，根據(jù)這些差異序列與野生型HcL序列差異的大小，選擇3種主要類型的變體即HcLV1、HcLV2、HcLV3和該3種變體的共有序列片段HcLVt進(jìn)行深入研究。在確定對蝦血藍(lán)蛋白大亞基確實(shí)存在變體的基礎(chǔ)之上，進(jìn)一步以HcLV1為研究對象探索同一變體類型不同序列的進(jìn)化關(guān)系，首先按常規(guī)方法對HcLV1進(jìn)行PCR擴(kuò)增與克隆，繼而任

6、意選取69個(gè)HcLV1陽性克隆進(jìn)行序列測定與序列比對，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HcLV1可以進(jìn)一步分為10種類型。進(jìn)化分析顯示，HcLV110種類型的序列可由兩條祖先序列（HcLV101，HcLV102）通過基因重組和堿基突變演化而來。由此說明，對蝦血藍(lán)蛋白大亞基存在多種變體序列，且這些變體之間存在著進(jìn)化關(guān)系。2、2種HcL變體全長變體全長cDNA的克隆及序列分析的克隆及序列分析基于已獲得的HcLV1、HcLV3部分序列，采取RACE技術(shù)，克隆HcL