我國(guó)養(yǎng)殖大菱鲆病毒性紅體病的研究.pdf

1、通過(guò)大量的疾病調(diào)查,該研究發(fā)現(xiàn)了一種可導(dǎo)致中國(guó)養(yǎng)殖大菱鲆大量死亡的流行性疾病.依照病魚(yú)的外觀癥狀,將該病暫稱之為大菱鲆"紅體病".通過(guò)對(duì)RBS的流行病學(xué)、組織和細(xì)胞病理學(xué)、病原人工感染和細(xì)胞接種實(shí)驗(yàn)、病毒的純化和分子生物學(xué)分類鑒定等研究,該論文在國(guó)內(nèi)外首次證實(shí)大菱鲆紅體病是由一種新的魚(yú)類虹彩病毒——"大菱鲆紅體病虹彩病毒"——引起的病毒性疾病,應(yīng)稱之為"大菱鲆病毒性紅體病".大菱鲆病毒性紅體病的流行病學(xué)調(diào)查顯示:苗期、養(yǎng)成期、親魚(yú)期的大

2、菱鲆均可感染此病,但以養(yǎng)成期最為常見(jiàn);發(fā)病魚(yú)全長(zhǎng)一般在10厘米到20厘米,體重介于100克至400克之間.病魚(yú)攝食量低或不攝食、活力弱、呼吸緩慢、散群,分散伏于養(yǎng)殖池四周或在水面附近緩慢游動(dòng).病毒性紅體病大菱鲆的解剖學(xué)特征主要有:(1)病魚(yú)體表無(wú)明顯損傷,但腹面沿脊椎骨附近皮下淤血、發(fā)紅,側(cè)鰭、尾鰭、胸鰭及鰭基部充血、發(fā)紅;(2)病魚(yú)貧血,鰓外觀呈暗灰色;(3)病魚(yú)血液稀薄、色淡,凝固性差,(4)病魚(yú)胃腸壁呈點(diǎn)狀出血;(5)病魚(yú)腎臟失血

3、發(fā)暗,呈灰白色.大菱鲆病毒性紅體病的組織病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),病魚(yú)的脾臟、腎臟存在有大量的肥大細(xì)胞,病魚(yú)鰓絲、脾臟、腸、腎臟和肝臟組織均存在不同程度的壞死.通過(guò)透射電子顯微鏡觀察,在病魚(yú)的多種組織包括鰓、脾臟、腸、腎臟中可以觀察到一種大小相同、形態(tài)相似的球狀病毒粒子,即TRBIV.為了證實(shí)TRBIV是大菱鲆病毒性紅體病的病原,該研究進(jìn)行了大菱鲆病毒性紅體病的人工感染試驗(yàn).將過(guò)濾除菌的含大量TRBIV的病魚(yú)脾組織勻漿液,通過(guò)腹腔注射的方式對(duì)健康

4、大菱鲆進(jìn)行人工感染,結(jié)果感染魚(yú)在3周內(nèi)的累積死亡率達(dá)85.7﹪,死亡大菱鲆表現(xiàn)出腹面和鰭邊發(fā)紅等外觀癥狀.由此證明TRBIV具有較強(qiáng)的致病力.為了進(jìn)一步驗(yàn)證TRBIV的致病性和病原性,該研究還開(kāi)展了牙鲆胚胎細(xì)胞系(flounder embryonic cell line,FEC)培養(yǎng)細(xì)胞接種TRBIV的試驗(yàn).依據(jù)TRBIV的形狀、大小、在感染細(xì)胞內(nèi)的位置以及靶組織類型等判斷,該病毒不同于已報(bào)道的大菱鲆虹彩病毒,是一種新的感染中國(guó)大菱鲆的

5、虹彩病毒.為了深入了解TRBIV的特性、分類地位,開(kāi)展了TRBIV的分子生物學(xué)鑒定研究.在明確了TRBIV的分類地位之后,該研究克隆了該病毒的兩個(gè)重要蛋白——結(jié)構(gòu)蛋白MCP和功能蛋白三磷酸腺苷酸酶(adenosine triphosphatease,ATPase)的全基因,得到長(zhǎng)度分別為1581bp和1286b的兩段TRBIV基因組片斷.該研究還開(kāi)展了TRBIV的PCR檢測(cè)技術(shù)的研究.通過(guò)一系列PCR引物的篩選、反應(yīng)參數(shù)的優(yōu)化、檢測(cè)技術(shù)