12631.羅布泊鹽湖可培養(yǎng)放線菌多樣性及pksⅱ功能基因篩選

1、SichuanAgriculturalUniversityDISSERTATIONSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementforMASTERDEGREEDiversityofgeneticandPKSIIgenesontheculturedActinobacterialinLopNurByTengYunDirectedbyProfZhangXiaopingAssociateProfGua

2、nTong—weiSichuanAgriculturalUniversity，Chengdu611130，Sichuan，RRChinaApril，2014捅斐鹽環(huán)境作為極端環(huán)境微生物研究的重要組成部分，具有分布廣泛，條件相對(duì)溫和等特點(diǎn)，蘊(yùn)含著大量的極端放線菌，是極端放線菌生長(zhǎng)的理想場(chǎng)所。鹽環(huán)境中的放線菌能產(chǎn)生如抗生素、耐鹽胞外酶、甜菜堿等多種次級(jí)代謝產(chǎn)物，在醫(yī)藥工業(yè)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、環(huán)境保護(hù)等方面有重要的應(yīng)用價(jià)值。研究鹽環(huán)境中的放線菌多樣性

3、，有利于放線菌物種和代謝產(chǎn)物資源庫的豐富。位于新疆若羌縣東北部的羅布泊鹽湖氣候條件特殊、地質(zhì)結(jié)構(gòu)高度鹽漠化。本研究的目的是為了挖掘其生境中可培養(yǎng)放線菌的資源和探索該環(huán)境中放線菌產(chǎn)生II型聚酮合成酶(PKSII)基因的潛能。以羅布泊鹽湖環(huán)境的土壤樣品為研究對(duì)象，采集到lO份樣品，采用6種不同鹽濃度和7種選擇性培養(yǎng)基分離放線菌，提取DNA進(jìn)行16SrDNA擴(kuò)增和16SrDNA全長(zhǎng)測(cè)序，并將序列進(jìn)行Blast比對(duì)。研究結(jié)果表明共獲得32株不同

4、的放線菌，分布在放線菌目的6個(gè)亞目中的6個(gè)屬內(nèi)，其中，鏈霉菌屬(Streptomyces)有15株，占全部獲得純培養(yǎng)菌株的469％，是該環(huán)境最優(yōu)勢(shì)的放線菌類群；其次是擬諾卡氏菌屬(Nocardiopsis)有13株，是處于第二優(yōu)勢(shì)地位的放線菌類群；還分離到一些糖霉菌屬(Glycomyces)、放線多孢菌屬(Actinopolyspora)、微球菌(Micrococcus)矛tl棲白蟻菌屬(Isoptericola)的菌株。有2株放線菌的

5、16SrDNA基因序列與已有效發(fā)表菌株的序列最大相似度小于97％，菌株編號(hào)SCAU—A一57與Nocardiopsisaegyptia最大序列同源性僅為97％；而菌株編號(hào)SCAU—A26與Glycomyceshalotolerans最高相似性僅為94％，為潛在的放線菌新分類單元。為了探索嗜鹽放線菌產(chǎn)生天然產(chǎn)物的潛力，選取獲得的32株放線菌，通過兼并引物進(jìn)行II型聚酮合成酶(pKSII)功能基因KS域的PCR擴(kuò)增，其中22株菌擴(kuò)增出目的D

6、NA片段，陽性率為69％。對(duì)陽性片段進(jìn)行轉(zhuǎn)化并測(cè)序，均被鑒定為PKSII功能基因。這些具有PKSII功能基因的菌株分屬于擬諾卡氏菌屬(Nocardiopsis)、鏈霉菌屬(Streptomyces)和微球菌屬(Micrococcus)三個(gè)屬，其中鏈霉菌屬中PKSII基因陽性率最高，占80％。本研究結(jié)果表明，羅布泊鹽湖地區(qū)放線菌具有豐富的放線菌資源多樣性，并蘊(yùn)藏一定的放線菌新類群。另外，鹽湖放線菌菌株都具有產(chǎn)生聚酮化合物的巨大潛力，本研究