T35s啟動(dòng)子的植物表達(dá)載體構(gòu)建及vp-,4-——st融合基因在苜蓿中的表達(dá).pdf

1、本研根據(jù)已發(fā)表的文獻(xiàn)，啟動(dòng)子的串聯(lián)能增強(qiáng)外源基因的表達(dá)，改造花椰菜病毒的35S啟動(dòng)子，將質(zhì)粒pBLG雙35S啟動(dòng)子雙酶切切下，連接到克隆載體pUC18上進(jìn)行測序，經(jīng)序列分析后將此雙35S啟動(dòng)子連接到克隆載體pJIT60上，與pJIT60上本身含有的雙35S啟動(dòng)子串聯(lián)連接，構(gòu)建一個(gè)含兩個(gè)A區(qū)，四個(gè)B區(qū)T35S，并將T35S啟動(dòng)子連接到克隆載體pUC18上進(jìn)行測序，經(jīng)序列分析后，通過酶切、連接、轉(zhuǎn)化將T35S啟動(dòng)子連接到植物表達(dá)載體pBLG

2、vp4-st上，構(gòu)建了植物表達(dá)載體pBLGT35Svp4-st。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將植物表達(dá)載體pBLGT35Svp4-st和pBLGvp4-st轉(zhuǎn)化苜蓿，經(jīng)卡那霉素(Kan)多重篩選，獲得抗性植株。 結(jié)果：T35S經(jīng)序列分析后，T35S啟動(dòng)子兩個(gè)A區(qū)同源率達(dá)到83.50％，四個(gè)B區(qū)同源率為80.31％。對(duì)植物表達(dá)載體pBLGT35Svp4-st進(jìn)行BamHI和SacⅠ雙酶切鑒定，可切下一大小約1491bp的目的條帶，與理論值一