海洋浮游硅藻的培育、活性成分分析及藥理學研究.pdf

1、海洋浮游硅藻(Marine planktonic diatom,MPD)是海洋微藻中的單細胞浮游生態(tài)類群,其胞外、胞內(nèi)物質(zhì)如多糖(Polysaccharide)和多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFA)含量豐富,在海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖和海洋生物制藥業(yè)中應用前景廣闊.本文從海洋浮游硅藻(MPD)藻種的分離和保存開始,對其優(yōu)化規(guī)模培養(yǎng)、增產(chǎn)、采收,胞內(nèi)和胞外物質(zhì)的提取、分離、純化、成分分析與結構修飾、藥理活

2、性和應用等方面進行了研究,得出結論如下:
　　1.海洋浮游硅藻藻種可采用稀釋法和微挑法加以分離,且后者分離的目的性、時效性更好.不同藻種的保存條件差異很大,在優(yōu)化專業(yè)培養(yǎng)基中接種比例為1:12(藻種密度為3×105 cells/ml),經(jīng)“雙抗”和GAF保護,新月菱形藻在4℃和無光照條件下,保存良好;三角褐指藻則在25℃和有光照條件下,易于保存.
　　2.海洋浮游硅藻在優(yōu)化專業(yè)培養(yǎng)基上可進行大規(guī)模培養(yǎng).隨著生長影響因子(Gr

3、owth affection factor,GAF)的加入,1000mg/L的GAF對新月菱形藻(Nitzschia closterium, NC)、800mg/L的GAF對三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum,PT)增產(chǎn)、助長和防污效果顯著;可采用低速離心法和絮凝法采收成熟藻體,以低速離心法操作更為簡便.把純化、促進培養(yǎng)目標藻的生長與抑制其他伴生雜藻生長相結合,增強海洋浮游硅藻大規(guī)模培養(yǎng)的抗污染性和適應性,提

4、高培養(yǎng)產(chǎn)出率,是本研究的創(chuàng)新之處.
　　3.將藻體采收完畢之后的離心上清液過濾、恒溫濃縮、醇提、脫蛋白、去色素、復溶、透析和冷凍干燥后得胞外物質(zhì)粗品,經(jīng)硫酸-蒽酮法定性檢測為多糖;再經(jīng)DEAE-C柱層析分離,可知其胞外多糖為三種多糖的混合物.采用柱前衍生化高效液相色譜法(HPLC)對純品均一多糖進行成分分析可知其中含有甘露糖(Man)、鼠李糖(Rham)、葡萄糖(Glu)和半乳糖(Gal)等單糖組分.通過“血清藥理學”等實驗方法進

5、行體內(nèi)、體外實驗表明,胞外多糖在抗腫瘤細胞S180與Hela、抗流感病毒FM和促進血液淋巴細胞增值等方面效果良好,而且經(jīng)氯磺酸-吡啶法硫酸酯化結構修飾的胞外多糖藥理活性顯著提高.胞外多糖的藥理學研究是海洋浮游硅藻基礎開發(fā)應用研究的全新領域.把海洋浮游硅藻作為傳統(tǒng)的生物餌料培養(yǎng)轉向生物醫(yī)藥和保健品應用領域,是本研究又一新的探索.
　　4.海洋浮游硅藻藻體經(jīng)超聲波破碎、氫氧化鉀－甲醇溶液甲酯化、石油醚萃取、低溫濃縮,得胞內(nèi)物質(zhì).氣相色