天?？瓢l(fā)育關(guān)系、基因條碼構(gòu)建及測序中假基因的研究.pdf

1、本文選用了天牛線粒體DNA的特定片段，采用直接測序法對(duì)不同種類天牛的線粒體DNA進(jìn)行了測序，并通過序列比對(duì)分析了天?？撇煌瑏喛频倪M(jìn)化關(guān)系。同時(shí)，在研究中針對(duì)出現(xiàn)假基因的情況作了初步探討。研究的主要結(jié)論如下： 通過對(duì)天?？莆鍌€(gè)亞科的天牛線粒體DNA的Cytb和16SrRNA基因片段進(jìn)行了測序，根據(jù)序列的差異建立了系統(tǒng)發(fā)育樹，并對(duì)天?？聘呒?jí)階元的分類進(jìn)行了初步探討。從對(duì)Cytb序列進(jìn)行分析的Bootstrap樹和N-J系統(tǒng)樹中可以看

2、出，幽天牛亞科的光胸?cái)嘌厶炫Ｅc花天牛亞科的雙斑厚花天牛先聚為一枝，隨后與溝脛天牛亞科的光肩星天牛的分枝相聚。三者相聚在一個(gè)節(jié)點(diǎn)后，再與天牛亞科的家茸天牛和鋸天牛亞科的中華薄翅天牛相聚在同一節(jié)點(diǎn)，且中華薄翅天牛明顯離節(jié)點(diǎn)較遠(yuǎn)。顯示出幽天牛亞科與花天牛亞科的親緣關(guān)系較近。其次是溝脛天牛亞科，再次是天牛亞科，最后是鋸天牛亞科，即五個(gè)天牛亞科呈現(xiàn)如下的關(guān)系：鋸天牛亞科→天牛亞科→溝脛天牛亞科→花天牛亞科→幽天牛亞科。從對(duì)16SrRNA序列構(gòu)建的

3、Bootstrap樹和N-J系統(tǒng)樹中可以看出，幽天牛亞科的光胸?cái)嘌厶炫：突ㄌ炫喛频碾p斑厚花天牛先聚在同一分枝，隨后與溝脛天牛亞科的粒肩天牛的分枝相聚。三者相聚在一個(gè)節(jié)點(diǎn)后，再與天牛亞科的家茸天牛相聚在同一節(jié)點(diǎn)，最后，與鋸天牛亞科的中華薄翅天牛和吉丁蟲科的花曲柳窄吉丁蟲相聚。顯示出五個(gè)天牛亞科也呈現(xiàn)出如下的進(jìn)化關(guān)系：鋸天牛亞科→天牛亞科→溝脛天牛亞科→花天牛亞科→幽天牛亞科。 通過對(duì)天?？?個(gè)亞科13個(gè)屬的16種共30個(gè)天牛樣品

4、及吉丁蟲科的花曲柳窄吉丁蟲和葉甲科的二紋柱螢葉甲的mtDNACOⅠ基因的一段序列進(jìn)行了分析，對(duì)天?？苹驐l碼的構(gòu)建進(jìn)行了初步的研究。結(jié)果顯示，樣品的堿基差異率由種內(nèi)到種間、屬間呈逐漸增大的趨勢，天牛不同分類階元的種間具有明顯的堿基差異，且差異分布各不相同，的確就像基因條碼一樣，因此筆者確信該基因可以作為天牛種類鑒定的依據(jù)，該段基因適合于基因條碼的構(gòu)建。對(duì)其靈敏度進(jìn)行了分析，顯示了引物的高度靈敏性與穩(wěn)定性，同時(shí)也說明了該反應(yīng)體系的穩(wěn)定性和

5、可重復(fù)性。但本研究測序天牛種類還較少，有必要選擇各分類階元主要種及重要檢疫性天牛一一測序，以建立天牛基因條碼系統(tǒng)，為天牛的鑒定和遺傳學(xué)、系統(tǒng)學(xué)研究提供更為科學(xué)的基礎(chǔ)。 在對(duì)不同地理來源的光肩星天牛進(jìn)行測序時(shí)發(fā)現(xiàn)，線粒體COⅠ—2基因的序列明顯分為兩組并且差異較大，通過比較用長片段擴(kuò)增技術(shù)和通用引物擴(kuò)增技術(shù)對(duì)來自河北霸州的光肩星天牛測得序列后發(fā)現(xiàn)，其中有一組有可能是出現(xiàn)了假基因，并對(duì)假基因的原因進(jìn)行了初步探討，認(rèn)為提取的總DNA中