不同方法生產(chǎn)的牛早期胚胎干擾素-tau基因mRNA表達活性分析.pdf

1、為了探討體外操作對牛胚胎IFN-τ基因的mRNA表達活性的影響。本研究采用原位雜交技術(shù)和半定量RT-PCR分析，以牛卵母細胞孤雌發(fā)育胚胎、體外受精胚胎、冷凍解凍的體外受精胚胎和體細胞核移植胚胎為材料，研究胚胎細胞IFN-τmRNA表達情況，結(jié)果顯示體外操作會影響牛胚胎IFN-τmRNA表達活性?！　〔捎玫馗咝?digoxigenin，DIG)標記的DNA探針，對體外生產(chǎn)不同日齡(3，4，5，6，7，9d)的牛孤雌發(fā)育胚胎、體外受精胚胎

2、和體細胞核移植胚胎細胞中IFN-τmRNA進行原位雜交，研究不同方法生產(chǎn)的牛胚胎中IFN-τmRNA表達情況。結(jié)果顯示，體外受精胚胎在第4天的16-細胞胚胎開始檢測到IFN-τ表達；體細胞核移植胚胎在第5天的致密桑椹胚開始表達IFN-τ基因，第7天的表達量明顯提高；而孤雌發(fā)育胚胎直到第6天的早期囊胚才開始表達。第5天的體細胞核移植胚胎和體外受精胚胎IFN-τ表達量有差異。第7天的體細胞核移植胚胎IFN-τ表達量明顯高于孤雌發(fā)育胚胎。胚齡

3、相同而發(fā)育階段不同的胚胎其IFN-τ的表達量有差異。　　對第7天的牛孤雌發(fā)育囊胚、體外受精囊胚、冷凍解凍的體外受精囊胚、體內(nèi)受精雄性囊胚和體細胞核移植囊胚用酸性Tyrode’s溶液(pH2.5)溶解透明帶后，利用半定量RT-PCR方法進行分析，比較不同方法生產(chǎn)的體外胚胎中IFN-τ基因轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明不同胚胎的灰度比值統(tǒng)計學上差異不顯著(p＞0.05)，但是，體外受精胚胎IFN-τ的表達量要高于體細胞核移植胚胎和孤雌胚胎，冷凍解凍后