玉米赤霉醇和米爾比菌素肟化物免疫學(xué)檢測技術(shù)研究.pdf

1、免疫學(xué)檢測技術(shù)是對微生物代謝產(chǎn)物及其衍生物的重要分析方法。本論文依據(jù)目前國內(nèi)外食品安全與農(nóng)獸藥資源篩選開發(fā)中，對有毒有害微生物代謝產(chǎn)物殘留快速檢測和微生物天然產(chǎn)物篩選開發(fā)的熱點，開展了玉米赤霉醇(ZER)和米爾比菌素肟化物(MILO)免疫學(xué)檢測技術(shù)研究，主要內(nèi)容包括ZER和MILO半抗原的設(shè)計，人工抗原合成，多克隆抗體制備和相應(yīng)的ELISA檢測方法的建立，取得結(jié)果如下：1.對玉米赤霉醇16號位羥基進(jìn)行改造，設(shè)計合成了模擬玉米赤霉醇特征結(jié)

2、構(gòu)的半抗原——ZER-16-羧丙基醚。并用混合酸酐法將其與載體蛋白BSA連接，用于免疫新西蘭大白兔，制備的抗血清效價達(dá)1：102400。以活性酯法合成的包被抗原建立間接競爭ELISA檢測方法(cI-ELISA)，對玉米赤霉醇的線性檢測范圍在18.39～1744.70ng/mL，最低檢測限(I10)為8.61ng/mL。抗體對甲醇有一定耐受能力，待測樣品中甲醇含量不易超過10％?？贵w與同系的真菌毒素玉米赤霉烯酮的交叉反應(yīng)率為1.35％。對

3、水樣中的玉米赤霉醇進(jìn)行添加回收試驗，樣品加標(biāo)回收率在90％～115％，變異系數(shù)為1.75％～7.02％。 2.用琥珀酸酐法對米爾比菌素肟化物C5位羥基進(jìn)行化學(xué)改造，合成了半抗原MILO-5-琥珀酰半酯，再將其用碳化二亞胺法與載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián)制備人工抗原。以MIL0-5-琥珀酰半酯與BSA的偶聯(lián)物免疫新西蘭大白兔獲得多克隆抗體，抗體效價達(dá)1：12800；建立的CI-ELISA檢測方法，線性檢測范圍在16.00～4394.18ng/