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文檔簡介
1、蘇丹紅Ⅰ(SudanI)即1-苯基偶氮-2-萘酚,是一種人工合成的脂溶性化工染料,并被證明是一種潛在的致癌物質(zhì),禁止作為食品染料添加在食品中。2003年5月,法國從印度進(jìn)口的紅辣椒粉中檢出蘇丹紅Ⅰ,對此發(fā)出緊急通知。在中國,2005年2月至5月蘇丹紅Ⅰ不斷在各種食品中檢出,比如:雞腿、漢堡、辣泡菜和辣椒醬等,引起人們消費恐慌。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和國家的重視,其檢測方法也不斷發(fā)展。目前已有電化學(xué)分析法、光譜法、色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技
2、術(shù)、免疫分析技術(shù)等檢測方法。酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)是一種簡單、準(zhǔn)確、快速的分析方法,具備靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點,己廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢驗、生物分析、食品分析和環(huán)境分析等領(lǐng)域中。為了建立快速、靈敏的蘇丹紅Ⅰ殘留免疫學(xué)分析方法,本研究在分析蘇丹紅Ⅰ免疫學(xué)特性的基礎(chǔ)上,采用單克隆抗體技術(shù)制備了蘇丹紅Ⅰ單克隆抗體,并組裝了間接競爭ELISA試劑盒。
本研究主要內(nèi)容包括:⑴重氮化法合成蘇丹紅Ⅰ的結(jié)構(gòu)類似物(CSDI),以活性
3、酯法將 CSDI與載體蛋白偶聯(lián),制備BSA-CSDI免疫抗原與OVA-CSDI。并用紫外掃描(UV)和聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進(jìn)行鑒定。用 SudanI人工免疫抗原(BSA-SudanI)免疫BALB/c小鼠。間接ELISA測定多抗血清效價,阻斷ELISA鑒定其抑制價。動物免疫試驗結(jié)果顯示:3只小鼠血清效價均達(dá)到了1×1.28-4,且3號小鼠多抗血清抗SudanI的IC50為67ng/mL,表明成功獲得了高效價、特異性好、
4、親和力較高的鼠源抗 SudanI多抗血清,為 SudanI殘留免疫學(xué)檢測方法的建立奠定了基礎(chǔ)。⑵間接ELISA和間接競爭ELISA檢測法選擇細(xì)胞融合備用鼠;運用雜交瘤技術(shù)制備蘇丹紅Ⅰ單克隆抗體(SudanImAb),并對單克隆抗體的效價、親和力、敏感性、特異性和亞型進(jìn)行鑒定;體內(nèi)誘生腹水法大量制備單克隆抗體。篩選出了6H6B1、6H6E6、6H6G10、6F12E2、6F12E5和6F12G2六株敏感特異的雜交瘤細(xì)胞;鑒定單抗亞型均為I
5、gG1;細(xì)胞培養(yǎng)上清間接 ELISA效價在1:6.4×102~1:1.28×103之間,6H6E6細(xì)胞株制作的腹水效價為1:6.6×105,蘇丹紅ImAb親和常數(shù)(Ka)為1.85×1010L/moL和1.94×1010L/moL,對蘇丹紅Ⅰ的 IC50為2ng/mL;與其它標(biāo)準(zhǔn)品無交叉反應(yīng)。通過試驗獲得了高效價、敏感、特異的蘇丹紅ImAb,可用于動物性食品中蘇丹紅Ⅰ的殘留檢測的免疫學(xué)試驗。⑶根據(jù)酶聯(lián)免疫吸附試驗原理,應(yīng)用蘇丹紅ImAb
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