TGFβ1及TNF-α與慢性乙型肝炎合并非酒精性脂肪肝關(guān)系的研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(HBV）感染是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。隨著人們生活水平的提高，脂肪肝的發(fā)病也越來(lái)越普遍，尤其是近年來(lái)，由于非酒精性脂肪肝 (nonalcoholic fatty liverdisease，NAFLD）的發(fā)病率逐年增加，導(dǎo)致慢性乙型肝炎(chronic virAlhepat it is B，CHB）與肝細(xì)胞脂肪變性合并存在的病例明顯增多，而乙肝病毒感染和脂肪肝之間的關(guān)系及相互影響國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少，因此受到眾多學(xué)者的關(guān)注。眾所周

2、知，一些慢性肝病如慢性乙型、丙型肝炎病毒感染、肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）及NAFLD 均和機(jī)體的免疫狀態(tài)有關(guān)。本課題擬從與慢性乙型肝炎和NAFLD 均有密切關(guān)系的兩個(gè)細(xì)胞因子著手，來(lái)探討慢性乙型肝炎與NAFLD 之間的關(guān)系及相互影響。
　　 有研究發(fā)現(xiàn)，在非酒精性脂肪肝組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factorβ1，TGFβ1）及其受體表達(dá)增加,在肝臟脂質(zhì)

3、代謝障礙引發(fā)脂肪肝進(jìn)程中腫瘤壞死因子（tumornecrosis fator Altha，TNF-α）也扮演了重要角色。本課題通過(guò)比較慢性乙型肝炎合并NAFLD與單純慢性乙型肝炎患者血漿中TNF-α、TGFβ1的變化，分析TNF-α、TGFβ1對(duì)慢性乙型肝炎合并NAFLD作用，為臨床慢性乙型肝炎合并NAFLD患者的轉(zhuǎn)歸、治療提供科學(xué)的理論依據(jù)。本論文共分兩個(gè)部分。第一部分：臨床研究部分，主要是觀察慢性乙型肝炎合并NAFLD患者血清中TN

4、F-α、TGFβ1水平；第二部分：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分,包括兩個(gè)實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)一:誘發(fā)HepG2.2.15細(xì)胞脂肪變性模型的構(gòu)建,實(shí)驗(yàn)二:TGFβ1對(duì)脂肪變性的HepG2.2.15細(xì)胞內(nèi)TG、ALT的影響。
　　 實(shí)驗(yàn)一:誘發(fā)HepG2.2.15細(xì)胞脂肪變性模型的構(gòu)建
　　 第一部分：臨床研究部分慢性乙型肝炎合并NAFLD患者血清TGFβ1及TNF-α水平檢測(cè)
　　 目的：觀察CHB 合并NAFLD患者和CHB患者血清TGF

5、β1、TNF-α的水平并探討其與CHB 合并NAFLD的關(guān)系。方法：收集CHB 合并NAFLD90例和CHB患者47例，根據(jù)腹部CT肝/脾CT 比值將脂肪肝分為輕、中、重度三組。采用ELISA 法檢測(cè)血清TGFβ1、TNF-α的濃度。結(jié)果：CHB 合并NAFLD組血清TGFβ1、TNF-α的濃度均明顯高于對(duì)照組(P＜0.001、P＜0.001)，TGFβ1、TNF-α濃度隨脂肪肝程度的加重而逐漸增高，且在CHB 合并NAFLD組中兩者存

6、在相關(guān)性。結(jié)論：① TGFβ1、TNF-α在CHB 合并NAFLD的發(fā)病機(jī)理中有一定的臨床意義。②在CHB 合并NAFLD患者中，TGFβ1及TNF-α的血清濃度的高低與其脂肪肝的程度存在密切關(guān)系。
　　 第二部分：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分實(shí)驗(yàn)一誘導(dǎo)HepG2.2.15細(xì)胞脂肪變性模型的構(gòu)建
　　 目的：建立乙型肝炎合并脂肪變性的細(xì)胞模型。方法：分別應(yīng)用不同濃度的油酸作用于肝癌細(xì)胞HepG2.2.15，建立乙型肝炎合并脂肪肝的細(xì)胞模

7、型。采用油紅O-蘇木素染色觀察油酸處理后細(xì)胞內(nèi)脂肪滴變化情況。結(jié)果：0.05mM、0.10mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM濃度的油酸在作用于肝細(xì)胞24h、48h、72h后，均可造成肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂。油紅O-蘇木素染色后光鏡下顯示，在細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)明顯的脂質(zhì)堆積，橘紅色脂肪滴數(shù)量明顯增多；隨油酸濃度的升高和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)堆積的越多，橘紅色脂肪滴數(shù)量也明顯增多。0.2mM 油酸作用72h時(shí)肝細(xì)胞脂肪變性最明顯。結(jié)論：0

8、.2mM 油酸作用72h可誘導(dǎo)HepG2.2.15 脂肪變性，從而成功建立乙型肝炎合并脂肪肝的細(xì)胞模型。
　　 實(shí)驗(yàn)二 TGFβ1對(duì)脂肪變性的HepG2.2.15細(xì)胞TG、ALT的影響
　　 目的：通過(guò)觀察TGFβ1對(duì)合并脂肪變性后的肝癌細(xì)胞HepG2.2.15細(xì)胞脂肪變性指標(biāo)的影響，了解其是否加重感染乙肝病毒后肝細(xì)胞脂肪變性的程度及肝細(xì)胞損傷程度。方法：將HepG2.2.15細(xì)胞分為三組，第一組為單純油酸組（0.2mM

9、）；第二組為油酸（0.2mM）+TGFβ1組：TGFβ1濃度為10ng/ml；第三組為空白對(duì)照組。加入各處理因素，作用72小時(shí)后，油紅O-蘇木素染色觀察HepG2.2.15細(xì)胞脂肪滴的變化情況；用反復(fù)凍融法裂解細(xì)胞，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的TG的含量；用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)細(xì)胞外培養(yǎng)基中的ALT的含量。結(jié)果：①油紅O-蘇木素染色后光鏡下顯示，與單純油酸組相比，油酸+TGFβ1橘紅色脂肪滴數(shù)量明顯增多；②單純油酸組HepG2.2.15