TGFβ1及TNF-α與慢性乙型肝炎合并非酒精性脂肪肝關系的研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(HBV）感染是一個嚴重的公共衛(wèi)生問題。隨著人們生活水平的提高，脂肪肝的發(fā)病也越來越普遍，尤其是近年來，由于非酒精性脂肪肝 (nonalcoholic fatty liverdisease，NAFLD）的發(fā)病率逐年增加，導致慢性乙型肝炎(chronic virAlhepat it is B，CHB）與肝細胞脂肪變性合并存在的病例明顯增多，而乙肝病毒感染和脂肪肝之間的關系及相互影響國內外報道較少，因此受到眾多學者的關注。眾所周

2、知，一些慢性肝病如慢性乙型、丙型肝炎病毒感染、肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）及NAFLD 均和機體的免疫狀態(tài)有關。本課題擬從與慢性乙型肝炎和NAFLD 均有密切關系的兩個細胞因子著手，來探討慢性乙型肝炎與NAFLD 之間的關系及相互影響。
　　 有研究發(fā)現，在非酒精性脂肪肝組織中轉化生長因子β(transforming growth factorβ1，TGFβ1）及其受體表達增加,在肝臟脂質

3、代謝障礙引發(fā)脂肪肝進程中腫瘤壞死因子（tumornecrosis fator Altha，TNF-α）也扮演了重要角色。本課題通過比較慢性乙型肝炎合并NAFLD與單純慢性乙型肝炎患者血漿中TNF-α、TGFβ1的變化，分析TNF-α、TGFβ1對慢性乙型肝炎合并NAFLD作用，為臨床慢性乙型肝炎合并NAFLD患者的轉歸、治療提供科學的理論依據。本論文共分兩個部分。第一部分：臨床研究部分，主要是觀察慢性乙型肝炎合并NAFLD患者血清中TN

4、F-α、TGFβ1水平；第二部分：細胞實驗部分,包括兩個實驗,實驗一:誘發(fā)HepG2.2.15細胞脂肪變性模型的構建,實驗二:TGFβ1對脂肪變性的HepG2.2.15細胞內TG、ALT的影響。
　　 實驗一:誘發(fā)HepG2.2.15細胞脂肪變性模型的構建
　　 第一部分：臨床研究部分慢性乙型肝炎合并NAFLD患者血清TGFβ1及TNF-α水平檢測
　　 目的：觀察CHB 合并NAFLD患者和CHB患者血清TGF

5、β1、TNF-α的水平并探討其與CHB 合并NAFLD的關系。方法：收集CHB 合并NAFLD90例和CHB患者47例，根據腹部CT肝/脾CT 比值將脂肪肝分為輕、中、重度三組。采用ELISA 法檢測血清TGFβ1、TNF-α的濃度。結果：CHB 合并NAFLD組血清TGFβ1、TNF-α的濃度均明顯高于對照組(P＜0.001、P＜0.001)，TGFβ1、TNF-α濃度隨脂肪肝程度的加重而逐漸增高，且在CHB 合并NAFLD組中兩者存

6、在相關性。結論：① TGFβ1、TNF-α在CHB 合并NAFLD的發(fā)病機理中有一定的臨床意義。②在CHB 合并NAFLD患者中，TGFβ1及TNF-α的血清濃度的高低與其脂肪肝的程度存在密切關系。
　　 第二部分：細胞實驗部分實驗一誘導HepG2.2.15細胞脂肪變性模型的構建
　　 目的：建立乙型肝炎合并脂肪變性的細胞模型。方法：分別應用不同濃度的油酸作用于肝癌細胞HepG2.2.15，建立乙型肝炎合并脂肪肝的細胞模

7、型。采用油紅O-蘇木素染色觀察油酸處理后細胞內脂肪滴變化情況。結果：0.05mM、0.10mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM濃度的油酸在作用于肝細胞24h、48h、72h后，均可造成肝細胞內脂質代謝紊亂。油紅O-蘇木素染色后光鏡下顯示，在細胞內出現明顯的脂質堆積，橘紅色脂肪滴數量明顯增多；隨油酸濃度的升高和作用時間的延長，細胞內的脂質堆積的越多，橘紅色脂肪滴數量也明顯增多。0.2mM 油酸作用72h時肝細胞脂肪變性最明顯。結論：0

8、.2mM 油酸作用72h可誘導HepG2.2.15 脂肪變性，從而成功建立乙型肝炎合并脂肪肝的細胞模型。
　　 實驗二 TGFβ1對脂肪變性的HepG2.2.15細胞TG、ALT的影響
　　 目的：通過觀察TGFβ1對合并脂肪變性后的肝癌細胞HepG2.2.15細胞脂肪變性指標的影響，了解其是否加重感染乙肝病毒后肝細胞脂肪變性的程度及肝細胞損傷程度。方法：將HepG2.2.15細胞分為三組，第一組為單純油酸組（0.2mM

9、）；第二組為油酸（0.2mM）+TGFβ1組：TGFβ1濃度為10ng/ml；第三組為空白對照組。加入各處理因素，作用72小時后，油紅O-蘇木素染色觀察HepG2.2.15細胞脂肪滴的變化情況；用反復凍融法裂解細胞，全自動生化分析儀測定細胞內的TG的含量；用全自動生化分析儀檢測細胞外培養(yǎng)基中的ALT的含量。結果：①油紅O-蘇木素染色后光鏡下顯示，與單純油酸組相比，油酸+TGFβ1橘紅色脂肪滴數量明顯增多；②單純油酸組HepG2.2.15