組織化學染色方法在生長板組織學研究中的應(yīng)用.pdf

1、目的：生長板是位于長骨遠端骺與干骺端之間的一層高度器官化的透明軟骨。在組織學上根據(jù)軟骨細胞的不同的分化階段，可以將生長板分為不同的水平區(qū)帶，即：靜止軟骨細胞帶、增殖軟骨細胞帶和肥大軟骨細胞帶。本研究通過對正常大鼠脛骨標本進行石蠟包埋、切片后分別應(yīng)用常規(guī)HE染色法、Masson三色法、AB-PAS染色法、甲苯胺藍染色法、藏花紅染色法、AZAN染色法、VG染色法、Mallory三色法、番紅染色法、固綠染色法、番紅．固綠染色法進行染色，比較上

2、述多種組織學染色方法在正常大鼠脛骨生長板組織切片中的染色規(guī)律，探討不同組織化學染色方法在生長板組織形態(tài)學研究中的應(yīng)用。 方法：對正常生長發(fā)育期大鼠脛骨標本固定、脫鈣后進行石蠟包埋和切片。切片脫蠟至水后分別進行了(1)常規(guī)染色：入蘇木精染液5分鐘；自來水洗1分鐘；入1％鹽酸酒精分色數(shù)秒；自來水洗1分鐘；入1％的伊紅3分鐘；自來水洗1分鐘；梯度酒精脫水；二甲苯透明；中性樹膠封片。(2)Masson三色法(苯胺藍復染)染色：入A液5分

3、鐘；0.2％醋酸稍洗；入5％磷鎢酸5-10分鐘；0.2％醋酸洗2次；入B液5分鐘；0.2％醋酸洗2次；梯度酒精脫水；二甲苯透明；中性樹膠封片。Masson三色法(亮綠復染)染色：入A液5分鐘；0.2％醋酸稍洗；入5％磷鎢酸5-10分鐘；0.2％醋酸洗2次；入B液5分鐘；0.2％醋酸洗2次；梯度酒精脫水；二甲苯透明：中性樹膠封片。(3)AB(阿爾辛藍)-PAS(過碘酸-Schiff)染色：蒸餾水浸洗1分鐘；入3％醋酸液中3分鐘；入阿爾新蘭

4、液中30分鐘；入3％醋酸液3分鐘；蒸餾水沖洗多次；入過碘酸氧化10分鐘；自來水沖洗；蒸餾水浸洗2次；在Schi蹴劑中染色10-20分鐘(據(jù)室溫)；流水沖洗2-5分鐘，蒸餾水洗片刻；用Harris蘇木精液淡染核；0.5％鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘；蒸餾水洗多次；95％及無水乙醇脫水；二甲苯透明；中性樹膠封固。(4)甲苯胺藍染色：入甲苯胺藍溶液30分鐘；水洗1分鐘；入冰醋酸溶液中于顯微鏡下分色數(shù)秒；蒸餾水洗2次，各2分鐘；自然風干；二甲苯透明；中性

5、樹膠封片。(5)藏花紅染色：入0.1％的藏花紅溶液染色2-3分鐘；鏡下分化數(shù)秒；梯度酒精脫水；二甲苯透明；中性樹膠封片。(6)"AZAN"三色法染色：入偶氮卡紅液4-8小時，37度染色；切片冷卻后入蒸餾水漂洗；于1％苯胺的95％酒精液分色至淡紅色：0.5％磷鎢酸水溶液媒染3-5分鐘；入苯胺藍．橘黃G染液0.5-1小時；濾紙沾干后在95％酒精分色1/2.1分鐘梯度酒精脫水；二甲苯透明；中性樹膠封片。（7)Van Gieson染色法染色：入

6、Weigert氏鐵蘇木素溶液5-10min；自來水充分洗；入Van Gieson氏液染30s-1min；95％酒精分化數(shù)秒；梯度酒精脫水；二甲苯透明；中性樹膠封片。(8)Mallory一步三色法染色：重鉻酸鉀液10分鐘；流水沖洗2分鐘；蒸餾水兩次；酸性復紅液2分鐘：蒸餾水稍洗；苯胺藍液20分鐘；95％乙醇快速分化；直接無水乙醇脫水；二甲苯透明；中性樹膠封固。(9)番紅染色：在1％番紅染液中浸染3分鐘；鏡下95％酒精分化數(shù)秒；風干；二甲苯

7、透明；中性樹膠封片。(10)固綠染色：于1％固綠染液中浸染3分鐘；鏡下95％酒精迅速分化；風干；二甲苯透明；中性樹膠封片。(11)番紅-固綠染色：于1％番紅染液中浸染3分鐘；入1％固綠復染3分鐘；95％酒精分化數(shù)秒；復加番紅染色2分鐘；鏡下95％酒精分化數(shù)秒；風干；二甲苯透明；中性樹膠封片。在OLIMPUS顯微鏡下觀察經(jīng)上述染色后的切片上的生長板組織，并進行圖像采集，比較上述組織學染色方法在正常大鼠脛骨生長板組織切片中的染色規(guī)律。

8、 結(jié)果：(1)常規(guī)皿染色：軟骨組織呈藍染，可見不同區(qū)帶的軟骨細胞，軟骨陷窩不著色，成熟的骨小梁被染成粉紅色。(2)Masson三色染色(苯胺藍復染)：軟骨組織呈淡藍色，可見不著色的骨陷窩以及不同區(qū)帶的軟骨細胞。骨小梁外形不規(guī)則或呈鹿角狀，隨著骨小梁趨于成熟，部分骨小梁中間的顏色呈紅色，成熟的骨小梁呈深藍色。骨樣基質(zhì)到成熟骨的染色規(guī)律為淡藍色到深藍色。纖維組織呈藍色條紋狀或邊緣光滑團塊狀，中間無骨母細胞和骨陷窩。Masson三色染色(亮

9、綠復染)：軟骨組織呈淡綠色，骨陷窩不著色，可見不同區(qū)帶的軟骨細胞。可見外形呈鹿角狀的骨小梁，隨著骨小梁趨于成熟，部分骨小梁中間的顏色呈紅色，成熟的骨小梁呈深綠色。骨樣基質(zhì)到成熟骨的染色規(guī)律為淡綠色到深綠色。(3)AB-PAS染色：軟骨組織呈深淺不一的藍色，可見軟骨細胞呈柱狀排列，從軟骨細胞靜止帶到肥大帶藍色漸淺，骨化中心的骨組織呈紅染。生長板與周圍組織界限清楚。(4)甲苯胺藍染色：軟骨組織基質(zhì)呈均勻的淡紫藍色，隱約可見呈柱狀排列的軟骨細

10、胞，細胞核被染成紫色。(5)藏花紅染色：軟骨組織呈深淺不一的橘色，從軟骨細胞靜止帶到肥大帶染色漸淺，骨小梁被染成粉紅色。軟骨組織與骨組織染色后差異明顯。(6)"AZAN"三色法：軟骨組織呈淡藍色，可見柱狀排列的軟骨細胞，生長板各區(qū)帶染色均較淺，骨小梁呈藍色，骨小梁之間可見橘紅色的紅細胞。(7)Van Gieson染色法：軟骨組織呈淡紅色，軟骨細胞核呈灰黑色。骨小梁形狀不規(guī)則，呈紅染，其間可見棕黃色的紅細胞。軟骨組織與骨組織界限分明。(8

11、)Mallory三色法：軟骨組織及骨小梁為藍染，深淺不一，骨小梁染色最深。軟骨細胞核呈紅色，骨小梁間紅細胞呈橘黃色。(9)番紅染色：軟骨組織及骨小梁呈深淺不一的粉紅色，從軟骨細胞靜止帶到肥大帶染色漸淺，骨小梁染色最淺。(10)固綠染色：骨小梁呈淡染的綠色，軟骨細胞及其基質(zhì)不著色。(11)番紅．固綠染色：軟骨組織呈深淺不一的粉紅色，從軟骨細胞靜止帶到肥大帶染色漸淺。骨小梁呈綠色，其間紅細胞被染成綠色。軟骨組織與骨組織對比鮮明。 結(jié)