實(shí)驗(yàn)性癌性惡病質(zhì)的發(fā)生及干預(yù).pdf

1、目的：通過復(fù)制癌性惡病質(zhì)(CC)的動(dòng)物模型，采用不同劑量的吲哚美辛(IN)進(jìn)行干預(yù)，觀察CC實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的去瘤體重、生化代謝指標(biāo)、細(xì)胞因子IL-6、TNF-a和腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡等參數(shù)，揭示細(xì)胞因子在CC發(fā)生中的作用及適當(dāng)劑量的IN能夠明顯逆轉(zhuǎn)CC，并初步探討IN抗癌抗惡病質(zhì)作用的可能機(jī)制。 方法：將體重為20-22克健康雄性BALB/c 小鼠(64只)稱重，隨機(jī)分為5組，HC組：健康對照組(8只)，CC組：CC+等滲鹽水對照組(

2、14只)，IN1 組：CC+IN0.5(mg·kg<'-1>·d<'-1>)組(14只)，IN2 組：CC+IN1.0(mg·kg<'-1>·d<'-1>)組(14只)，IN3組：CC+IN2.0 (mg·kg<'-1>·d<'-1>)組(14只)。將鼠結(jié)腸腺癌26(colon26)細(xì)胞株皮下接種于各組小鼠，復(fù)制CC動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?'[1]>，周后，小鼠開始出現(xiàn)頸背部皮毛毛糙、毛色發(fā)暗，活動(dòng)遲緩等表現(xiàn)，消瘦、衰竭，全部小鼠進(jìn)入CC狀態(tài)。荷

3、瘤的第9天，開始每天給予INl、IN2、IN3組0.5、1.0、2.0(mg·kg<'-1>·d<'-1>)，CC組等量的生理鹽水分別腹腔注射治療一周，觀察小鼠進(jìn)入惡病質(zhì)狀態(tài)后及IN治療后惡病質(zhì)參數(shù)及腫瘤的增殖和凋亡指標(biāo)的變化情況。應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀測定血總蛋白(TB)、白蛋白(ALB)、血糖(GLU)、乳酸脫氫酶(LDH)等代謝指標(biāo)：雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測定血清IL-6、TNF-a的水平；流式細(xì)胞分析儀(FCM)測

4、定腫瘤組織中抗捌亡基因bcl-2的表達(dá)及癌細(xì)胞的增殖和凋亡等指標(biāo)。觀察比較這些指標(biāo)在各組之間的差異。至第16天脫頸椎處死HC組8只，CC、IN1、IN2、IN3組各10只小鼠。各組余下4只分別繼續(xù)注射IN和生理鹽水，劑量、注射次數(shù)不變，觀察各組小鼠的生存時(shí)間。 結(jié)果： 1 動(dòng)物模型荷瘤組小鼠接種 colone-26細(xì)胞后3～5天，多數(shù)小鼠可以觸及到瘤體，精神差、活動(dòng)少、攝食飲水量變化不明顯。7-8天后瘤體長至1cm<'3

5、>，小鼠出現(xiàn)消瘦、精神差、皮毛毛糙雜亂、行動(dòng)遲緩、攝食飲水量相對減少，全部小鼠進(jìn)入惡病質(zhì)狀態(tài)。IN治療組小鼠腹腔注射3、4天后精神見好、動(dòng)作較前變得靈活、毛發(fā)也有改觀，但攝食飲水量及瘤體體積未見明顯變化。 2 體重第16天處死實(shí)驗(yàn)組小鼠后，測得CC組較HC組小鼠去瘤體重明顯下降(P<0.05)，中低劑量的IN治療后體重有所回升(P<0.05)，但未達(dá)到健康組水平，高劑量組效果差，各組瘤體重量無明顯差別(P>0.05)。

6、3 生化指標(biāo)各組小鼠發(fā)生CC后，營養(yǎng)指標(biāo)均出現(xiàn)不同程度的代謝消耗狀態(tài)(P<0.05)。給予IN干預(yù)后，IN1、IN2組血ALB、GLU濃度出現(xiàn)明顯的回升，而血LDH水平一定程度上被下調(diào)(P<0.05)。IN3組較CC組糖代謝有所改善(P<0.05)，而血ALB、LDH水平的改善不明顯(P>0.05)。各組小鼠之間的血TB水平變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4 血清細(xì)胞因子HC組血清中未檢出IL-6、TNF-a活性，而CC組小

7、鼠血清中檢出很高IL-6，TNF-a水平。給予IN治療后中低劑量組細(xì)胞因子水平均有很大程度的下調(diào)(P<0.05)，高劑量組變化尢統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 5 腫瘤的增殖和凋亡IN治療后，IN1、IN2組腫瘤組織中的bcl-2基因表達(dá)明顯下調(diào)、癌細(xì)胞的凋亡率升高(P<0.05)。 IN1、IN2組測得細(xì)胞G<,0>/G<,1>期比例增加、 S期比例下降、增殖指數(shù)PI明顯下降(P<0.05)，IN3組各指標(biāo)變化較CC組的差異均無

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 6 生存時(shí)間CC組小鼠平均生存時(shí)間為35.3天，中低劑量組治療后生存時(shí)間延長7～8天，高劑量組較CC組生存時(shí)間的變化差異無顯著性(P>0.05)。 結(jié)論： 1 本研究成功復(fù)制了一個(gè)與人類CC極為相似的理想動(dòng)物模型，對惡病質(zhì)的進(jìn)一步研究有著重要意義。 2 惡病質(zhì)小鼠除了去瘤體重降低、營養(yǎng)失衡外，血清IL-6、TNF-a 活性很高，提示代謝紊亂產(chǎn)生的IL-6、TNF-a等細(xì)胞因子

9、與CC的發(fā)生密切相關(guān)，是CC發(fā)生的一個(gè)重要機(jī)制。 3 中低劑量的IN能夠明顯改善CC小鼠的一般狀態(tài)，增加體重改善其營養(yǎng)代謝指標(biāo)，降低血IL-6、TNF-a活性，調(diào)整CC引起的全身代謝紊亂；下調(diào)bcl-2基因的表達(dá)，改善細(xì)胞周期的分布，抑制癌細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)凋亡，從而達(dá)到抗癌抗惡病質(zhì)作用并延長生存時(shí)間。 4 高劑量的IN除了改善CC的一般情況外，對改善小鼠的營養(yǎng)狀態(tài)及調(diào)節(jié)細(xì)胞因子水平，抑制腫瘤增長效果均不明顯，考慮可能和再