抗肝衰復(fù)方對(duì)重型肝炎患者肝臟合成功能的影響及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：我國(guó)乙型肝炎病毒(HBV)感染率約占人口 10％-12％，其中約1％-2％會(huì)導(dǎo)致急性肝衰竭。肝炎病毒引起的急性肝衰竭稱(chēng)為重型肝炎。由于其征候變化多端，病機(jī)錯(cuò)綜復(fù)雜，給臨床辨證論治帶來(lái)了諸多困難。我們認(rèn)為其病因病機(jī)的關(guān)鍵是“濕熱疫毒”。感受濕熱疫毒，熱毒內(nèi)蘊(yùn)，煎灼營(yíng)血，薰蒸肝膽，肝失疏泄，膽汁排泄不暢而外溢，從而導(dǎo)致重型肝炎。其治則是清熱解毒，利濕攻下。由此建立了抗肝衰復(fù)方。 目的：觀察抗肝衰復(fù)方對(duì)重型肝炎患者肝臟合成功能的

2、影響，并建立急性肝衰竭大鼠模型，觀察抗肝衰復(fù)方對(duì)急性肝衰竭大鼠肝組織HMGB1和PCNA的影響，從減輕肝損傷和促進(jìn)肝再生兩方面探討抗肝衰復(fù)方對(duì)大鼠急性肝衰竭的作用機(jī)制。 方法：1.臨床觀察：治療組和對(duì)照組患者各 60 名，均為重型肝炎患者；對(duì)照組給予常規(guī)西醫(yī)基礎(chǔ)綜合治療，治療組在上述綜合治療基礎(chǔ)上，加用抗肝衰復(fù)方口服或灌腸治療，觀察兩組患者的白蛋白(Alb)、凝血酶原活動(dòng)度(PTA)、膽固醇(T-ch)指標(biāo)。2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：健康雄

3、性wistar大鼠110只，體重180-220克，隨機(jī)分為6組：正常組10 只，模型組20只，PHGF組20只，茵陳組20只，抗肝衰復(fù)方小、大劑量組分別20只。除正常組外其余各組分別給予 D-GalN 800mg/kg和 LPS0.1mg/kg的劑量，腹腔注射一次成模(已經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)揭示此造模方法成功)，正常組給予等量生理鹽水腹腔注射。各組均于造模后2h用藥，按每次1.5ml/100g，分上下午每天兩次灌胃。PHGF組，按藥物濃度1.28

4、mg/ml灌服 PHGF；茵陳組，按生藥濃度2.4g/ml 灌服中藥；抗肝衰復(fù)方小劑量組，按生藥濃度3.75g/ml灌服中藥；抗肝衰復(fù)方大劑量組，按生藥濃度7.5g/ml灌服中藥；模型組和正常組均分別按1.5ml/100g灌服生理鹽水，每天2次，連用三天。造模后72h取材。(1)觀察造模后72小時(shí)內(nèi)大鼠病死率，眼球采血，檢測(cè)ALT、AST、TBil。(2)取肝組織普通病理切片常規(guī)染色后，光鏡觀察結(jié)構(gòu)變化。(3)取肝組織蛋白印跡法檢測(cè)HM

5、GB1蛋白。(4)取肝組織免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè) PCNA 蛋白。 結(jié)果：1.臨床觀察：白蛋白(Alb)、凝血酶原活動(dòng)度(PTA)、膽固醇(T-ch)指標(biāo)治療后與治療前相比明顯改善，差異有顯著性意義(P<0.05)，抗肝衰復(fù)方組治療后PTA檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組比較，PTA改善明顯，差異有非常顯著性意義(P<0.01)。 2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果：（1）大鼠病死率：造模后，大鼠病死率明顯升高。模型組與正常組比較，差異有非常顯著性意義(P<0.

6、01)，抗肝衰復(fù)方大劑量、PHGF組與模型組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。（2）肝功能：模型組大鼠ALT、AST、TBil水平均明顯高于正常組(P<0.01)，PHGF組、茵陳組、抗肝衰復(fù)方小、大劑量組上述指標(biāo)均較模型組低。與模型組比較，PHGF 組、抗肝衰復(fù)方大劑量組差異有顯著性意義(P<0.01或P<0.05)，茵陳組、抗肝衰復(fù)方小劑量組亦有差異(P<0.05)；抗肝衰復(fù)方大小劑量、茵陳組間比較差異無(wú)顯著性意義 (P>0.0

7、5)。（3）肝組織病理學(xué)改變：模型組大鼠肝細(xì)胞見(jiàn)肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝細(xì)胞呈彌漫性壞死，匯管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度較重。與模型組相比，PHGF對(duì)照組、茵陳組、抗肝衰復(fù)方大、小劑量組肝細(xì)胞損傷程度均有改善，而以抗肝衰復(fù)方大劑量組改善最明顯。（4）肝組織 HMGB1 表達(dá)水平：模型組大鼠 HMGB1 表達(dá)水平明顯高于正常組(P<0.01)，PHGF組、茵陳組、抗肝衰復(fù)方大、小劑量組上述指標(biāo)亦高于正常組(P<0.01)。PHGF組、抗肝衰復(fù)方大劑量組

8、上述指標(biāo)較模型組均有所下降的，差異有顯著性意義(P<0.05)。其中，以抗肝衰復(fù)方大劑量組下降最明顯。且經(jīng)直線回歸相關(guān)分析顯示，大鼠 HMGB1 表達(dá)水平與ALT、AST、TBil均成顯著正相關(guān)(P<0.01)，HMGB1 表達(dá)水平與各組大鼠肝臟壞死程度成正相關(guān)。（5）肝組織PCNA表達(dá)水平：正常組大鼠肝組織中，PCNA表達(dá)水平最低，PHGF組和模型組相比，差異有非常顯著性意義(P<0.01)。茵陳組、抗肝衰復(fù)方大、小劑量組與模型組相比

9、，差異也均有顯著性意義(P<0.01)。茵陳組、抗肝衰復(fù)方大、小劑量組的PCNA表達(dá)介于模型組和PHGF組之間。且抗肝衰復(fù)方大劑量組高于抗肝衰復(fù)方小劑量組，抗肝衰復(fù)方小劑量組高于茵陳組。 結(jié)論：1.抗肝衰復(fù)方能明顯改善重型肝炎患者肝臟合成功能。2.晚期炎性細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫損傷在大鼠急性肝衰竭中發(fā)揮一定的作用。3.抗肝衰復(fù)方對(duì)急性肝衰竭大鼠模型有保護(hù)作用，其機(jī)制可能涉及抗肝衰復(fù)方能抑制 HMGB1 的釋放，降低內(nèi)毒素血癥，從而減