骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)肥大心肌脂肪酸代謝影響的體外研究.pdf

1、背景：干細(xì)胞移植在心臟疾病治療中的應(yīng)用日漸顯示出巨大的前景，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)由于具有易獲取、易擴(kuò)增的優(yōu)越性，成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn)。即使對(duì)MSCs對(duì)宿主產(chǎn)生的影響還有較多未知之處，由于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中取得的令人鼓舞的成果，目前已進(jìn)入臨床試驗(yàn)，因此更需要基礎(chǔ)研究的支持，從而使運(yùn)用更安全、有效和可控。研究表明：心肌缺血及重塑等都伴隨著心肌代謝的改變，在對(duì)MSCs移植能改善心功能的機(jī)制研究中，研

2、究發(fā)現(xiàn)MSCs可分化為心肌樣細(xì)胞修復(fù)受損心肌組織，減少心肌組織纖維化，但對(duì)宿主的脂肪酸代謝是否存在影響還未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)觀察與MSCs共培養(yǎng)的心肌細(xì)胞脂肪酸代謝以及肌小節(jié)結(jié)構(gòu)變化情況。 目的：本實(shí)驗(yàn)利用MSCs與心肌細(xì)胞共培養(yǎng)體系及肥大心肌細(xì)胞模型的建立，模擬體內(nèi)心肌病及細(xì)胞移植的旁分泌環(huán)境，觀察共培養(yǎng)心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化，通過(guò)檢測(cè)一些轉(zhuǎn)錄因子及細(xì)胞內(nèi)游離脂肪酸含量探討MSCs對(duì)宿主心肌細(xì)胞脂肪酸代謝的影響，并觀察此影響對(duì)心肌重塑

3、的影響及其機(jī)制。 方法：1．取Wistar大鼠的股骨和脛骨骨髓，用貼壁法分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增體外MSCs；取Wistar大鼠新生鼠(1～3天)的心臟，用消化分離法、差速貼壁法及化學(xué)試劑抑制法分離、純化、培養(yǎng)心肌細(xì)胞。2．以血管緊張素Ⅱ刺激新生鼠心肌細(xì)胞，建立肥大心肌細(xì)胞模型，模擬心肌病表現(xiàn)，用transwell插入式培養(yǎng)皿建立MSCs和心肌細(xì)胞共培養(yǎng)體系，模擬MSCs移植的心肌病動(dòng)物模型。3．本實(shí)驗(yàn)分為四組(n=5)：實(shí)驗(yàn)組為共培養(yǎng)

4、組，包括共培養(yǎng)一組(即MSCs與肥大心肌細(xì)胞共培養(yǎng)組)和共培養(yǎng)二組(即MSCs與心肌共培養(yǎng)后血管緊張素Ⅱ作用組)，對(duì)照組包括正常組和模型組(即單純AngⅡ作用組)。采用光鏡及免疫熒光顯微鏡檢測(cè)觀察心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變，檢測(cè)各組NF-κB、PPARα和PPARγ的活性，同時(shí)用紫外分光光度法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)游離脂肪酸含量的變化。4．以titin的Z帶抗原為橋梁來(lái)觀測(cè)肌小節(jié)的形態(tài)。 結(jié)果：1．模型組較正常組心肌細(xì)胞NF-κB活性明顯增強(qiáng)(p

5、<0.001)，PPARα活性(P<0.01)和PPARγ活性(P<0.001)減弱，心肌細(xì)胞內(nèi)FFA含量明顯增加(p<0.01)。2．共培養(yǎng)一組與單純AngⅡ作用組比較，心肌細(xì)胞NF-κB活性減弱(P<0.001)，心肌細(xì)胞內(nèi)FFA含量顯著降低(P<0.001)，而PPARα活性和PPARγ活性增強(qiáng)(P<0.05和P<0.01)。3．共培養(yǎng)二組較單純Ang Ⅱ作用組心肌細(xì)胞，NF-κB活性減弱(p<0.001)，PPARγ活性增強(qiáng)(P