小麥DERB及EREBP類轉(zhuǎn)錄因子的特性分析.pdf

1、植物在生長過程中，會遇到諸如干旱、低溫和高鹽的非生物逆境脅迫影響。逆境條件下植物對環(huán)境刺激作出反應(yīng)，通過一系列信號傳遞過程最終激發(fā)轉(zhuǎn)錄因子，啟動基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)來抵御外界得脅迫傷害。轉(zhuǎn)錄因子對基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控起至關(guān)重要的作用。 本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建了干旱誘導(dǎo)的小白麥cDNA文庫，并且從中克隆了W23,W18,W17等基因。通過生物信息學(xué)的方法進(jìn)行比對發(fā)現(xiàn)這些基因都含有60個左右氨基酸的AP2/EREBP保守域，都屬于AP2/EREBP基因

2、家族。W23,W18，屬于DREB家族，W17屬于EREB家族。 本論文是在此基礎(chǔ)上，通過體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)轉(zhuǎn)錄激活實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步證明它們表達(dá)產(chǎn)物的功能特性，為轉(zhuǎn)基因分析和研究轉(zhuǎn)錄因子在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的調(diào)控機(jī)理做理論基礎(chǔ)研究。 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)表明W23和W18能和DRE探針特異結(jié)合，推測其能夠調(diào)控含有DRE順式元件的下游基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)；W17能和ERE探針特異結(jié)合，推測其能夠調(diào)控含有ERE順式元件的下游基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。這些基因編

3、碼的產(chǎn)物是特異結(jié)合順式元件的，這符合轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合特性。同時基因產(chǎn)物與突變探針的結(jié)合實(shí)驗(yàn)也得到了順式元件中重要堿基的信息。 為了進(jìn)一步證明這些轉(zhuǎn)錄因子的激活特性，本實(shí)驗(yàn)將構(gòu)建好的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到帶有DRE和ERE順式元件的酵母報道子中。轉(zhuǎn)錄激活實(shí)驗(yàn)表明這些轉(zhuǎn)錄因子不但具有結(jié)合區(qū)，能特異結(jié)合到順式元件上，并且有轉(zhuǎn)錄激活的功能。而且它們的轉(zhuǎn)錄激活特性是不一樣的。這符合關(guān)于同一類的轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合區(qū)比較保守，但它們的激活區(qū)是不同的研