低色氨酸培養(yǎng)基與色氨酸代謝產(chǎn)物聯(lián)合抑制T細(xì)胞增殖的體外研究.pdf

1、目的:本課題應(yīng)用小鼠骨髓來(lái)源樹(shù)突細(xì)胞(DC)刺激同種異系小鼠T淋巴細(xì)胞,應(yīng)用低色氨酸培養(yǎng)基及色氨酸代謝產(chǎn)物抑制T淋巴細(xì)胞增殖,并揭示其抑制T淋巴細(xì)胞增殖機(jī)制。
　　 方法:采用培養(yǎng)基細(xì)胞因子選擇法體外培養(yǎng)小鼠骨髓來(lái)源DC,流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC表面抗原CD80、CD86、MHCⅡ、CD11c表達(dá)情況,在加入色氨酸代謝產(chǎn)物的低色氨酸培養(yǎng)基中混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)并觀察對(duì)異系T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響。利用Annexin-v及PI雙染法測(cè)定T細(xì)

2、胞凋亡情況。使用SPSS15.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　 結(jié)果:經(jīng)過(guò)體外培養(yǎng),每只小鼠可獲得5.6×106個(gè)骨髓來(lái)源DC,細(xì)胞具備典型樹(shù)突狀結(jié)構(gòu),高表達(dá)CD80(94.56％)、CD86(88.42％)、MHC-Ⅱ(86.12％)、CD11c(96.79％)。經(jīng)免疫磁珠法可分離出純度達(dá)90％以上的CD4+T細(xì)胞,進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng),低色氨酸組較正常色氨酸組刺激指數(shù)(SI)明顯降低,加入色氨酸代謝產(chǎn)物KYN組、3-HK組、3-

3、HAA組SI值均隨其濃度升高而明顯降低,且與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其中以3-HAA抑制CD4+T細(xì)胞增殖作用最明顯,所需濃度最低。低色氨酸培養(yǎng)基與色氨酸代謝產(chǎn)物對(duì)CD4+T細(xì)胞增殖的抑制具有疊加作用。Annexin-V及PI雙染法測(cè)定各組CD4+T細(xì)胞凋亡,低色氨酸組凋亡率明顯升高,且加入色氨酸代謝產(chǎn)物后凋亡率進(jìn)一步升高。
　　 結(jié)論:培養(yǎng)基細(xì)胞因子選擇法可收獲大量的骨髓源DC,免疫磁珠法可分離純度較高的CD4+T細(xì)胞。低色