液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在生命磷化學(xué)中的分析應(yīng)用研究.pdf

1、生命科學(xué)被譽(yù)為2l世紀(jì)的最前沿科學(xué)之一。隨著人類第一張基因序列草圖的完成和發(fā)展，生命科學(xué)的研究正在進(jìn)入一個(gè)嶄新的后基因組學(xué)，即蛋白質(zhì)組學(xué)時(shí)代。正如基因草圖的提前繪制得益于大規(guī)模全自動(dòng)毛細(xì)管電泳測(cè)序技術(shù)一樣，借助于現(xiàn)代生物質(zhì)譜技術(shù)，后基因組研究將得到迅猛發(fā)展。而現(xiàn)代分離技術(shù)和生物質(zhì)譜的聯(lián)用技術(shù)，極大地?cái)U(kuò)展了生物質(zhì)譜的應(yīng)用領(lǐng)域，正在成為生命科學(xué)研究中必不可少的技術(shù)支撐。 論文用Atherton-Todd反應(yīng)，以二乙基亞磷酸酯(DEP

2、H)為磷?；噭谒?、醇、四氯化碳和三乙胺存在下，將磷?；牒瑝A性氨基酸的肽段，成功實(shí)現(xiàn)了對(duì)氨基酸、肽和蛋白質(zhì)的磷?；揎?。用電噴霧質(zhì)譜(ESI/MS)對(duì)20種氨基酸進(jìn)行磷?；磻?yīng)的過(guò)程進(jìn)行了在線跟蹤，發(fā)現(xiàn)只有賴氨酸(Lys)和組氨酸(ms)可生成二磷?；a(chǎn)物。并用ESI/Ms和液質(zhì)聯(lián)用(HPLC/MS)等現(xiàn)代分析技術(shù)，對(duì)十種已知序列的肽段和三種常用的蛋白質(zhì)(胰島素、溶菌酶和細(xì)胞色素c)進(jìn)行了磷?；磻?yīng)產(chǎn)物的分離分析，根據(jù)肽段和蛋白

3、質(zhì)的分子量增加值，確定了肽段和蛋白質(zhì)中所含Lys、ms殘基的數(shù)目，驗(yàn)證了修飾位點(diǎn)發(fā)生在肽鏈的Lys、ms殘基上和N端，同時(shí)，根據(jù)對(duì)色譜分離的組分進(jìn)行Ms解析，進(jìn)一步確認(rèn)了多種形態(tài)的磷?；a(chǎn)物。研究結(jié)果將有助于肽的一級(jí)序列分析。 研究建立了N一磷?；彼崤c腺苷反應(yīng)體系中的單腺苷酸和二腺苷單磷酸等產(chǎn)物的HPLC/ESI/Ms分離分析方法，并對(duì)2'-AMP，3'-AMP，5'-AMP和3'-5’ApA的Ms裂解機(jī)理進(jìn)行了研究。結(jié)果表

4、明，HPLC/ESI/Ms可以快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確地鑒別和定量該復(fù)雜反應(yīng)體系中痕量的2'-AMP、3'-AMP、5'-AMP、3'-5’ApA。首次選擇了六種不同極性的N一磷酰化氨基酸與四種核苷混合液進(jìn)行反應(yīng)，并用所建立的HPLC/EsI/MS分析方法對(duì)混合液反應(yīng)體系進(jìn)行了分離分析，通過(guò)對(duì)可能生成的核苷酸產(chǎn)物XMP、XpY進(jìn)行離子抽提和Ms信息分析，結(jié)果不僅觀察到了單核苷酸(XMP)和二核苷單磷酸(XpY)的產(chǎn)物生成，而且發(fā)現(xiàn)不同反應(yīng)體系所

5、產(chǎn)生的核苷酸種類和含量都不同，結(jié)果表明了不同極性的氨基酸與核苷混合液反應(yīng)時(shí)所表現(xiàn)出的活性差異。該研究結(jié)果將為“磷?；被釣樯鹪催^(guò)程中核酸、蛋白質(zhì)共同起源”學(xué)說(shuō)，提供一定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和先進(jìn)的研究方法。 對(duì)地塞米松磷酸鈉(DexP)的ESI/Ms參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，探討了DexP的質(zhì)譜裂解規(guī)律，研究建立了DexP在不受豚鼠外淋巴液背景干擾情況下的ItPLC分離分析條件。利用優(yōu)化的HPLC/ESI/MS分析方法，分別對(duì)腹腔注射和鼓室內(nèi)

6、注藥等給藥途徑下的豚鼠內(nèi)耳外淋巴液樣品中的DexP進(jìn)行了定性、定量分析，構(gòu)建了兩種不同給藥方式下的藥時(shí)曲線，獲得了藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。該研究結(jié)果為耳疾的臨床治療提供了直接的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和可靠的科學(xué)依據(jù)。 進(jìn)行了肝病患者尿液中乳果糖(L)和甘露醇(M)的llPLC-RID分離分析的方法學(xué)研究，獲得了不受尿樣背景干擾的分析方法；并對(duì)L、M的ESI/MS的質(zhì)譜裂解規(guī)律進(jìn)行了研究，利用HPLC/MS方法的質(zhì)譜信息，對(duì)尿液樣品的L、M的色譜峰進(jìn)行

7、了進(jìn)一步定性確認(rèn)，保證了結(jié)果的正確性。準(zhǔn)確測(cè)定了肝硬化自發(fā)性腹水感染(SM)患者、肝硬化腹水無(wú)感染(SA)患者和健康志愿者的尿液中L、M的排出率L％，排泄比率L/M，以及SAI患者在兩種不同治療方式下的L/M變化，探討了L/M與病情、與血漿內(nèi)毒素ET水平之間的關(guān)系，為深入研究SAI疾病的病理生理過(guò)程、改善臨床治療效果提供了大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和科學(xué)依據(jù)。 選擇有望形成WTO煙草殘留貿(mào)易技術(shù)壁壘的7種除草劑進(jìn)行了方法學(xué)研究。將7種除草劑

8、二甲戊靈、異丙樂(lè)靈、仲丁靈、草乃敵、敵草胺、異丙甲草胺、吡蟲(chóng)啉分為三組分別進(jìn)行研究，第一組為二甲戊靈、異丙樂(lè)靈、仲丁靈，第二組為草乃敵、敵草胺、異丙甲草胺，第三組為吡蟲(chóng)啉。首先對(duì)煙草樣品中的殘留提取方法進(jìn)行了研究，優(yōu)化了不同的樣品前處理過(guò)程，結(jié)果表明，煙草樣品用超聲波乙酸乙酯提取后，第一組和第二組用凝膠滲透色譜將提取物中的脂溶性大分子去除后得到純化，第三組吡蟲(chóng)啉則用液液分配方法純化。分別對(duì)上述3組除草劑進(jìn)行了色譜方法學(xué)研究，建立了不受煙