FFAR1在吡格列酮拮抗棕櫚酸誘導的β細胞脂毒性凋亡和氧化應(yīng)激的作用.pdf

1、目的：
　?。?）觀察FFAR1是否參與PIO拮抗β細胞脂毒性凋亡的作用；
　　（2）探討FFAR1介導PIO拮抗β細胞脂毒性凋亡與氧化應(yīng)激的關(guān)系；
　　（3）研究FFAR1發(fā)揮介導效應(yīng)是否通過PLCγ-ERK1/2-PPARγ信號通路。
　　方法：
　?。?）以對葡萄糖敏感的小鼠胰島β細胞系（βTC6）作為研究對象，應(yīng)用RNAi慢病毒載體(siRNA)或FFAR1過表達慢病毒載體(FFAR1+)轉(zhuǎn)染βTC

2、6細胞以調(diào)控FFAR1基因表達；1.0 mmol/L棕櫚酸（PA）干預(yù)β細胞24小時，建立脂毒性β細胞模型，不同濃度PIO干預(yù)β細胞不同時間段；以觀察FFAR1對PIO拮抗β細胞脂毒性凋亡的影響。
　　（2）PIO干預(yù)無轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)染慢病毒（siRNA或FFAR1+）的脂毒性β細胞；同時設(shè)置H2O2誘導的β細胞損害作為氧化應(yīng)激的陽性對照；分析FFAR1介導PIO保護作用與氧化應(yīng)激的關(guān)系。
　　（3）調(diào)控FFAR1的表達或運用阻滯

3、劑抑制信號蛋白活性，并以FFAR1的特異激動劑 TAK-875干預(yù)脂毒性β細胞作為對照，觀察 FFAR1發(fā)揮效應(yīng)與 PLCγ-ERK1/2-PPARγ信號級聯(lián)的關(guān)系。
　?。?）技術(shù)手段：流式細胞術(shù)和TUNEL檢測β細胞的凋亡；RT-PCR檢測FFAR1基因的表達；Western blot檢測FFAR1，氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白（NAPDH氧化酶亞基p47phox，bcl-2，Bax，cleaved caspase3）和信號因子（PLCγ

4、，ERK1/2，PPARγ）的表達；DCFH-DA探針檢測細胞內(nèi)活性氧含量，ELISA檢測細胞內(nèi)IP3水平。
　　結(jié)果：
　?。?)PIO可呈濃度和時間依賴性改善脂毒性導致的β細胞凋亡和FFAR1表達抑制；沉默F(xiàn)FAR1表達可減弱PIO改善脂毒性導致的β細胞凋亡，而誘導FFAR1表達，則可增強PIO抗β細胞凋亡的作用；FFAR1表達水平與β細胞凋亡呈負相關(guān)。
　　（2）沉默F(xiàn)FAR1表達可減弱 PIO對脂毒性誘導的NA

5、PDH氧化酶亞基p47phox， Bax，cleaved caspase3表達和ROS產(chǎn)生的抑制以及對bcl-2表達的上調(diào)作用；而誘導FFA1R高表達則可增強PIO上述拮抗氧化應(yīng)激的作用。同樣，這種效應(yīng)也發(fā)生在H2 O2誘導的氧化應(yīng)激上。
　?。?）PIO或TAK-875均可上調(diào)脂毒性導致的PLCγ，ERK1/2，PPARγ表達抑制和細胞內(nèi)IP3水平的下降；而沉默F(xiàn)FAR1表達可削弱PIO上調(diào)上述蛋白表達的作用；誘導FFAR1過表