PRRSV-SCQ株結構基因生物信息學及人工感染仔豬病理變化與超微結構研究.pdf

1、本研究以頻繁發(fā)生繁殖障礙癥候群的母豬、出現(xiàn)頑固性呼吸癥狀和較高死亡率的仔豬飼養(yǎng)場為研究對象，運用血清流行病學調查方法(ELISA檢測方法)，對四川地區(qū)(包括重慶市的部分縣市)的大型規(guī)模化豬場的種豬、部分商品豬群以及小型種豬場采取抽樣和有針對性地對引種種豬進行PRRS的血清學調查。然后進行病毒的分離和病毒的分子生物學研究。主要研究包括：　　1.運用IDEXX公司生產(chǎn)的ELISA檢測試劑盒對所采集的血清樣品進行檢測。　　2.以出現(xiàn)繁殖障

2、礙的母豬的血清并通過ELISA檢測為抗體陽性者，接種Marc-145單層細胞，經(jīng)盲傳至第四代時出現(xiàn)典型的細胞病變效應(CPE)；細胞培養(yǎng)物經(jīng)電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)其中有球形的病毒粒子，粒子大小為40-80nm，核心直徑為20-40nm；用抗PRRSV特異性抗體能特異地中和病毒，中和指數(shù)為100?！　?.成功地建立了分離株SCQ人工感染斷奶仔豬的病理模型。　　4.根據(jù)GenBank中ATCCVR-2332的的全基因序列，設計了6對能特異性擴增

3、出SCQ株的結構蛋白基因的引物，以PRRSV-SCQ病毒株為基礎材料，應用一步法RT-PCR方法，通過反應條件和反應參數(shù)的優(yōu)化，擴增出SCQ株基因組中的包括ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF76個結構蛋白基因的cDNA片段，其大小分別為800bp、819bp、592bp、628bp、594bp和510bp?！　?.通過DSgene1.11分析軟件對cDAN文庫中的重組質粒pRSF2、pRSF3、pRSF4、pRS