人乳頭瘤病毒16型感染特異性免疫治療的實驗及臨床初步研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學碩士學位論文人乳頭瘤病毒16型感染特異性免疫治療的實驗及臨床初步研究姓名：黃偉峰申請學位級別：碩士專業(yè)：皮膚病與性病學指導教師：刁慶春20030501第三軍醫(yī)大學碩士研究生論文細胞集落刺激因子( G M ．C S F ) 、自細胞介素．4 ( I L 一4 ) 聯(lián)合誘導下向D C 定向分比，并負載H P V l 6 E 7 4 9 - 5 7 多肽。流式細胞儀檢測D C 特異性表面分子的表達。四唑赫比色法( M T T )

2、法檢測其在混合淋巴細胞反應( M L R ) 中刺激同種淋巴細胞增殖的能力。結(jié)果：經(jīng)細胞因子誘導生成并負載抗原的D C 光鏡下具有典型形態(tài)；D C 特異性表面分子的表達率( ％) 分別為：C D I a 5 8 ．4 士6 ．7 、C D 8 37 1 ．2 + 54 、H L A ．D R 7 4 ．8 a ：4 ．2 、C D 8 0 7 0 ．6 士3 ．4 ：M T T 法顯示其對同種淋巴細胞有較強的促增殖作用。結(jié)論：通過細胞因

3、子體夕卜誘導并負載抗原的D C 為成熟的、功能性D C 。三、細胞毒性實驗( L D H 釋放法) 檢測負載H P V l 6 E 7 m 。，多肽D C 誘導抗原特異性細胞免疫反應方法：以負載H P V l 6E 7 4 9 ．5 7 及乙型肝炎病毒核心抗原多肽1 8 ．2 7 ( H B C l 8 _ 2 7 ) D C誘導的抗原特異性細胞毒性T 淋巴細胞( C T L ) 和E 7 4 9 - 5 7 多肽直接誘導的淋巴細胞為效

4、應細胞，以C a s k i 細胞株為實驗組靶細胞，S i H a 及A N 3 C A 細胞株為對照組靶細胞，運用乳酸脫氫酶( L D H ) 釋放法檢測在1 ：1 2 ．5 、l ：2 5 、1 ：5 0 效靶比下效應細胞對靶細胞的殺傷效應。結(jié)果：D C 負載H P V l 6 E 7 4 9 _ 5 7 多肽誘導的特異性C T L 在各效靶比均能對H L A ．A 2 + 、H P V l 6 + 的C a s k i 細胞產(chǎn)生特

5、異性殺傷作用，而無關(guān)肽H B C l 8 - 2 7 致敏D C 后誘導的特異性C T L 對C a s k i 無明顯的殺傷活性：同時D C 負載H P V l 6E 7 4 9 ．5 7 多肽誘導的特異性C T L 對H L A —A 2 一、H P V l 6 一腫瘤細胞S i H a 及H P V 一腫瘤細胞A N 3 C A 亦無明顯殺傷作用。E 7 4 9 ．5 7 多肽直接誘導的淋巴細胞對C a s k i 也無明顯的殺傷

6、作用。結(jié)論：負載H P V l 6 E 7 4 9 ．5 7 多肽的D C 體外可誘導高效、特異性的C T L 效應。四、H P V l 6 E 7 一，多肽D c 治療H L A —A 2 + 、H P V l 6 + 復發(fā)性尖銳濕疣患者的觀察方法：H L A ．A 2 + 、H P V l 6 + 復發(fā)性尖銳濕疣患者分治療組、實驗組。各組常規(guī)電凝治療后，治療組輔以D C 免疫治療，對照組采用干擾素局部注射治療。觀察治療前后兩組患者外

7、周血T 淋巴細胞亞群和皮損的病理改變。并通過隨訪，觀察治療后各組的復發(fā)情況。結(jié)果：兩組患者治療前后外周血T 淋巴細胞亞群未見明顯變化。治療過程中，治療組患者保留的靶皮損變小或部分消退。治療后靶皮損處病理顯示凹空細胞明顯減少，真皮內(nèi)可見中等密度的淋巴細胞浸潤。同時治療組復發(fā)率明顯低于對照組( P < 0 ．0 5 ) 。結(jié)論：負載H P V l 6E 7 4 9 ．5 7 多肽的D C 在H P V 感染局部可誘導抗原特異性免疫應答