人重組VEGF蛋白、多克隆抗體的制備及在腫瘤檢測方面的初步研究.pdf_第1頁
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1、東北師范大學碩士學位論文人重組VEGF蛋白、多克隆抗體的制備及在腫瘤檢測方面的初步研究姓名：KhadidjaCHENTOUF申請學位級別：碩士專業(yè)：細胞生物學指導教師：王麗20090601AbstractVascularendothelialgrowthfactor(VEGF)isadimericglycoproteinof34_42kDaItisthemostpotentendothelialcellmitogenandalsoare

2、gulatorofvascularpermeabilityItisexpressedbyavarietyofnormalcells，butissignificantlyoverexpressedbymalignanttumors，whereitcallbeproducedbythetumorcellsthemselvesorbystromalcellsThisglycoproteinplaysacrucialroleinmanypath

3、ologicconditionsandmalignanciesbecauseitstimulatescapillarytubeformation，endothelialcellproliferation，tumorinvasionnandmetastasis，therebyplayinganessentialangiogenicrolepivotalfortumorgrowthandaggressivenessVEGFisemergin

4、gasapowerfulnewprognostict001TheaimofthepresentstudyistoproducespecificrabbitpolyclonalantibodiesagainstbacteriallyexpressedhumanVEGF165usingarecombinantDNAapproachAplasmidhasbeenconstructedtodirectthesynthesisofrecombin

5、anthumanVEGFI65(rhVEGFl65)inEscherichiacoliasafusionproteincontainingaHis6tagattheNterminusunderthecontrolofT7promoterTherhVEGF165wassynthesizedinlargeamountsandaccumulatedintheformofinclusionbodiesuponinductionwithIPTGI

6、nclusionbodiesweresolubilizedin8Mureaandpurifiedbasedonits6xHis—tagbyaffinitychromatographyusingNickelAgaroseColumnandrefoldedbydialysisTwabbitswereimmunizedwiththepurifiedrecombinantproteintoproducepolyclonalanti—humanV

7、EGFantibodyThetiterwascheckedwithindirectELISAandthefinaltiterwasl：25600WeusedthepurifiedrecombinantproteinandpolyclonalantibodytodetectVEGFexpressionlevelsintheserumof33tumorpatientsand25healthycontrolsbyanestablishedsa

8、ndwichELISAThemeanantigenconcentrationinserumofpatiemswasapproximatelv407pg／mlandsignificantlyhigherthanthoseinthehealthycontrolsinwhichthecirculatingVEGFantigensconcentrationwasnotdetectable滬005)Thus，thisnewlyELISAcould

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