擬康氏木霉對蔬菜真菌病害防治的研究.pdf

1、本文從玉米秸稈中篩選分離得到一株生長勢很強(qiáng)的木霉，經(jīng)鑒定為擬康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)。系統(tǒng)地研究了該菌對多種病原菌的拮抗作用和分生孢子懸液對番茄灰霉病害的防治作用以及其生防機(jī)制；從其發(fā)酵液中提取、分離了胞外多糖，并對其理化性質(zhì)進(jìn)行了初步的研究；研究了對木霉多糖及菌絲水提物對植物番茄及黃瓜幼苗抗病性的誘導(dǎo)作用；通過正交實驗對其液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化。以期為該菌在生物防治中的應(yīng)用提供理論依據(jù)，研究結(jié)果

2、如下： (1)對峙培養(yǎng)5d時，擬康氏木霉對灰葡萄孢、尖鐮孢、番茄葉霉病菌、番茄早疫病菌、辣椒疫霉及辣椒炭疽菌的抑制率分別為73％、62％、86％、77％、68％、91％，拮抗機(jī)制主要為競爭和抗生等。離體防治試驗表明，擬康氏木霉孢子懸液對番茄灰霉病的防效最為顯著，其濃度為106、107、108cfu/ml時，在離體莖段和葉盤上的防效分別為29.8％、53.8％、62.5％和59.1％、66.1％、70.3％;在盆栽試驗和大棚試驗中

3、的防效分別為48.3％、64.6％、68.3％和37.7％、46.2％、60.6％。濃度為107、108cfu/ml時在各試驗中的防效均達(dá)到或高于甲基托布津的防效。 (2)用濃度0.5-8％(g/ml)的擬康氏木霉菌絲水浸提物灌根處理黃瓜幼苗4d后接種枯萎病菌，調(diào)查病指。結(jié)果表明，各濃度處理組均可降低幼苗的發(fā)病率，當(dāng)濃度為4％時防效達(dá)到53.8％，進(jìn)一步提高水提物的濃度對保護(hù)作用的增強(qiáng)作用不明顯。用4％的浸提物灌根處理黃瓜幼苗，

4、測定下胚軸內(nèi)PAL和POD的活性及木質(zhì)素的含量。結(jié)果表明，PAL和POD的活性及木質(zhì)素的含量分別于處理后6h、30h、30h開始升高，最高值時分別是對照的2.2、3.1、4.4倍。時間進(jìn)程試驗表明，處理后4d幼苗才具有抗病性。處理4d后對莖和葉接種灰霉病，結(jié)果表明兩部位灰霉病的發(fā)病率均顯著低于對照。水提物在體外對兩種病原菌均無抑制作用，因此黃瓜對枯萎病和灰霉病抗病性的提高是菌絲水提物誘導(dǎo)幼苗產(chǎn)生了抗病性的結(jié)果，這種抗性是系統(tǒng)的、非特異性

5、的?？共⌒钥赡芘c木質(zhì)素含量的升高有關(guān)。 (3)擬康氏木霉的培養(yǎng)液過濾后經(jīng)3520吸附柱脫色，Seveag法脫蛋白，乙醇沉降得到木霉胞外多糖粗品TPS-0。粗品經(jīng)SephadexG-75葡聚糖凝膠層析分離純化后，得到純品TPS-1、TPS-2，得率分別為81.7％、4.5％，經(jīng)苯酚-硫酸法測定兩者的糖含量分別為97％、89％。HPLC分析表明，TPS-1、TPS-2的分子量分別約為4811Da、2468Da。 (4)葉面噴

6、施不同濃度(50-600mg/L)的擬康氏木霉的胞外多糖TPS-1，可顯著降低番茄灰霉病的發(fā)病率，提高與植物系統(tǒng)抗病性相關(guān)酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、過氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)的活性。酶活性上升幅度隨胞外多糖的濃度增加而遞增，濃度達(dá)到200mg/L以上時增加趨緩。酶活性在3-4d達(dá)到最高，之后有所下降，但仍高于對照。當(dāng)用濃度為200mg/L的多糖處理時，三種酶活性達(dá)到最高時分別為對照的123％、146％和102％。體外試

7、驗未發(fā)現(xiàn)該寡糖對灰霉菌的生長有抑制作用，表明灰霉病發(fā)病率的降低可能與多糖誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性有關(guān)。 (5)采用單因素和正交試驗對擬康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)的液態(tài)發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)化后的擬康氏木霉發(fā)酵控制參數(shù)為：培養(yǎng)基配方為麥麩30g/L，玉米粉30g/L，葡萄糖7.5g/L，KH2PO41g/L;搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)時間為6d，培養(yǎng)基的初始pH值為5.0～6.0，發(fā)酵溫度為30℃。本研究結(jié)果為利用廉價易得