擬康氏木霉對(duì)蔬菜真菌病害防治的研究.pdf

1、本文從玉米秸稈中篩選分離得到一株生長(zhǎng)勢(shì)很強(qiáng)的木霉，經(jīng)鑒定為擬康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)。系統(tǒng)地研究了該菌對(duì)多種病原菌的拮抗作用和分生孢子懸液對(duì)番茄灰霉病害的防治作用以及其生防機(jī)制；從其發(fā)酵液中提取、分離了胞外多糖，并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行了初步的研究；研究了對(duì)木霉多糖及菌絲水提物對(duì)植物番茄及黃瓜幼苗抗病性的誘導(dǎo)作用；通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)其液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化。以期為該菌在生物防治中的應(yīng)用提供理論依據(jù)，研究結(jié)果

2、如下： (1)對(duì)峙培養(yǎng)5d時(shí)，擬康氏木霉對(duì)灰葡萄孢、尖鐮孢、番茄葉霉病菌、番茄早疫病菌、辣椒疫霉及辣椒炭疽菌的抑制率分別為73％、62％、86％、77％、68％、91％，拮抗機(jī)制主要為競(jìng)爭(zhēng)和抗生等。離體防治試驗(yàn)表明，擬康氏木霉孢子懸液對(duì)番茄灰霉病的防效最為顯著，其濃度為106、107、108cfu/ml時(shí)，在離體莖段和葉盤(pán)上的防效分別為29.8％、53.8％、62.5％和59.1％、66.1％、70.3％;在盆栽試驗(yàn)和大棚試驗(yàn)中

3、的防效分別為48.3％、64.6％、68.3％和37.7％、46.2％、60.6％。濃度為107、108cfu/ml時(shí)在各試驗(yàn)中的防效均達(dá)到或高于甲基托布津的防效。 (2)用濃度0.5-8％(g/ml)的擬康氏木霉菌絲水浸提物灌根處理黃瓜幼苗4d后接種枯萎病菌，調(diào)查病指。結(jié)果表明，各濃度處理組均可降低幼苗的發(fā)病率，當(dāng)濃度為4％時(shí)防效達(dá)到53.8％，進(jìn)一步提高水提物的濃度對(duì)保護(hù)作用的增強(qiáng)作用不明顯。用4％的浸提物灌根處理黃瓜幼苗，

4、測(cè)定下胚軸內(nèi)PAL和POD的活性及木質(zhì)素的含量。結(jié)果表明，PAL和POD的活性及木質(zhì)素的含量分別于處理后6h、30h、30h開(kāi)始升高，最高值時(shí)分別是對(duì)照的2.2、3.1、4.4倍。時(shí)間進(jìn)程試驗(yàn)表明，處理后4d幼苗才具有抗病性。處理4d后對(duì)莖和葉接種灰霉病，結(jié)果表明兩部位灰霉病的發(fā)病率均顯著低于對(duì)照。水提物在體外對(duì)兩種病原菌均無(wú)抑制作用，因此黃瓜對(duì)枯萎病和灰霉病抗病性的提高是菌絲水提物誘導(dǎo)幼苗產(chǎn)生了抗病性的結(jié)果，這種抗性是系統(tǒng)的、非特異性

5、的?？共⌒钥赡芘c木質(zhì)素含量的升高有關(guān)。 (3)擬康氏木霉的培養(yǎng)液過(guò)濾后經(jīng)3520吸附柱脫色，Seveag法脫蛋白，乙醇沉降得到木霉胞外多糖粗品TPS-0。粗品經(jīng)SephadexG-75葡聚糖凝膠層析分離純化后，得到純品TPS-1、TPS-2，得率分別為81.7％、4.5％，經(jīng)苯酚-硫酸法測(cè)定兩者的糖含量分別為97％、89％。HPLC分析表明，TPS-1、TPS-2的分子量分別約為4811Da、2468Da。 (4)葉面噴

6、施不同濃度(50-600mg/L)的擬康氏木霉的胞外多糖TPS-1，可顯著降低番茄灰霉病的發(fā)病率，提高與植物系統(tǒng)抗病性相關(guān)酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、過(guò)氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)的活性。酶活性上升幅度隨胞外多糖的濃度增加而遞增，濃度達(dá)到200mg/L以上時(shí)增加趨緩。酶活性在3-4d達(dá)到最高，之后有所下降，但仍高于對(duì)照。當(dāng)用濃度為200mg/L的多糖處理時(shí)，三種酶活性達(dá)到最高時(shí)分別為對(duì)照的123％、146％和102％。體外試

7、驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)該寡糖對(duì)灰霉菌的生長(zhǎng)有抑制作用，表明灰霉病發(fā)病率的降低可能與多糖誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性有關(guān)。 (5)采用單因素和正交試驗(yàn)對(duì)擬康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)的液態(tài)發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)化后的擬康氏木霉發(fā)酵控制參數(shù)為：培養(yǎng)基配方為麥麩30g/L，玉米粉30g/L，葡萄糖7.5g/L，KH2PO41g/L;搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為6d，培養(yǎng)基的初始pH值為5.0～6.0，發(fā)酵溫度為30℃。本研究結(jié)果為利用廉價(jià)易得