臭牡丹提取液對(duì)氣道高反應(yīng)疾病模型的藥理作用的初步研究.pdf

1、氣道高反應(yīng)是一種常見的臨床表現(xiàn)，主要見于支氣管哮喘，慢性阻塞性肺疾病、病毒性上呼吸道感染等急慢性呼吸道疾病?，F(xiàn)一般認(rèn)為氣道高反應(yīng)的發(fā)病機(jī)制是氣道炎癥，故藥物治療手段主要是從抗炎和對(duì)癥治療兩個(gè)方向進(jìn)行防治，雖然這些藥物可以治療或緩解氣道高反應(yīng)，但不能解決病情反復(fù)發(fā)作和阻斷氣道結(jié)構(gòu)重塑與肺功能衰退進(jìn)程等問題。臭牡丹在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中廣泛用于治療癰疽，疔瘡，乳腺炎，關(guān)節(jié)炎，濕疹，頭痛，牙痛等癥，近年來也有報(bào)道臭牡丹提取液具有對(duì)抗遲發(fā)性超敏反應(yīng)和細(xì)胞

2、免疫的抑制作用以及緩解關(guān)節(jié)炎、腎炎、瘧疾、鎮(zhèn)痛催眠、縮宮等作用。因此，臭牡丹有可能具有作為治療氣道高反應(yīng)性疾病藥物開發(fā)的潛在價(jià)值。 目的：研究臭牡丹作為潛在的治療氣道高反應(yīng)性疾病新藥的開發(fā)價(jià)值。 方法： 一、臭牡丹總提物的作用觀察 1.提取臭牡丹總的有效成分，做成口服制劑。 2.用臭氧應(yīng)激建立新型的氣道高反應(yīng)小鼠模型，方法如下：將小鼠置于40cm×30cm×25cm塑料箱內(nèi)，2.0ppm臭氧與新鮮

3、空氣混合導(dǎo)入箱中，臭氧應(yīng)激5d，每天20min。 3.將實(shí)驗(yàn)小鼠一共分為5組：正常對(duì)照組、藥物對(duì)照組、模型組、藥物治療組和激素治療組。 4.通過測(cè)量小鼠氣道反應(yīng)性、支氣管肺灌洗液(BALF)中的白細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類、外周血中的白細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類、BALF上清液中的乳酸脫氫酶的含量，觀察肺臟病理切片氣道與肺組織的病變程度來評(píng)價(jià)藥物治療效果；觀察小鼠肝、腎組織的病理切片及外周血的白細(xì)胞計(jì)數(shù)來初步評(píng)估臭牡丹藥物的毒性作用。

4、5.通過血清藥理學(xué)方法觀察臭牡丹含藥血清對(duì)永生化支氣管上皮細(xì)胞株的增殖作用。 二、臭牡丹活性成分的作用觀察 1.分離提取臭牡丹的三種活性成分，即A類、B類和C類，并做其成分的預(yù)試檢查；然后做成三種口服制劑。 2.在臭氧應(yīng)激氣道高反應(yīng)小鼠模型上(建模方法同上)，用三種含不同臭牡丹活性成分的口服制劑給模型小鼠灌胃治療。 3.將實(shí)驗(yàn)小鼠一共分為5組：正常對(duì)照組、模型組、A類治療組、B類治療組和C類治療組。

5、 4.通過測(cè)量小鼠氣道反應(yīng)性、支氣管肺灌洗液(BALF)中的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、外周血中的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、BALF上清液中的總蛋白的含量，觀察肺病理切片的氣道與肺組織的病變程度來評(píng)價(jià)臭牡丹不同活性成分的治療效果。 結(jié)果： 一、臭牡丹總提物的治療作用效果 1.在不同濃度的乙酰甲膽堿激發(fā)狀態(tài)下模型組小鼠的氣道阻力(RL)比值均要明顯高于對(duì)應(yīng)的正常對(duì)照組小鼠的RL比值，說明造模成功。在不同濃度的乙酰甲膽堿激發(fā)狀態(tài)下臭牡丹藥物治療

6、組小鼠的RL比值均要明顯低于對(duì)應(yīng)的模型組小鼠的RL比值，療效達(dá)到激素治療組水平。 2.模型組小鼠的BALF中白細(xì)胞計(jì)數(shù)大于正常對(duì)照組的BALF中自細(xì)胞數(shù)目，藥物治療組小于模型組。白細(xì)胞分類觀察發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠BALF內(nèi)增高的白細(xì)胞主要是粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞，藥物治療可降低粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞的數(shù)目。 3.模型組小鼠外周血白細(xì)胞總數(shù)增高，藥物治療組的白細(xì)胞總數(shù)少于模型組。外周血的白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)顯示，模型組的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單

7、核細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目均要高于對(duì)照組，藥物治療組的上述細(xì)胞數(shù)目均少于模型組。 4.從BALF中乳酸脫氫酶(LDH)含量的趨勢(shì)來看，模型組的LDH含量增高，藥物治療可以降低臭氧應(yīng)激引起的增高的LDH含量。 5.小鼠肺病理切片HE染色結(jié)果觀察(觀察指標(biāo)包括上皮細(xì)胞脫落、管壁增厚、管壁平滑肌層增厚、管腔內(nèi)分泌物量、周圍血管及支氣管炎癥細(xì)胞滲出程度和肺泡結(jié)構(gòu)改變程度)，模型組的肺組織病理改變明顯，藥物治療可減輕肺病變程度。

8、 6.肝、腎的病理切片HE染色后各組小鼠的肝和腎結(jié)構(gòu)均未發(fā)現(xiàn)炎癥改變或損傷，提示臭牡丹總提物對(duì)肝、腎無明顯毒副作用。藥物對(duì)照組與正常對(duì)照組的外周血白細(xì)胞總數(shù)相比較差別無意義，提示臭牡丹提取液無白細(xì)胞抑制作用、無明顯全身性毒副作用。 7.MTT法觀察人支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，稀釋二倍、一倍、未稀釋的三組含藥血清的活細(xì)胞數(shù)在接種后12h，36h，48h，3d，4d，5d六個(gè)時(shí)間點(diǎn)均要高于不含藥小鼠血清組，提示含藥血清可能具有促進(jìn)

9、支氣管上皮細(xì)胞增殖的作用。 二、臭牡丹中不同活性成分的治療作用效果 1.在本輪實(shí)驗(yàn)中，在不同濃度的乙酰甲膽堿激發(fā)狀態(tài)下模型組小鼠的氣道阻力(RL)比值均要明顯高于對(duì)應(yīng)的正常對(duì)照組小鼠的RL比值，說明造模成功。C類治療組與A類治療組在不同濃度的乙酰甲膽堿激發(fā)狀態(tài)下RL比值均要明顯低于模型組；B類治療組只有在0.78mg/ml的乙酰甲膽堿激發(fā)狀態(tài)下的RL比值明顯低于模型組，其它三種濃度的乙酰甲膽堿激發(fā)時(shí)的RL比值與模型組相比

10、無差異。 2.白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，模型組小鼠的BALF中白細(xì)胞計(jì)數(shù)要高于正常對(duì)照組，C類治療組與A類治療組小鼠的BALF中白細(xì)胞計(jì)數(shù)要明顯低于模型組，B類治療組小鼠的BALF中白細(xì)胞計(jì)數(shù)與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.模型組小鼠中外周血的總的白細(xì)胞數(shù)目大于正常對(duì)照組中外周血的白細(xì)胞數(shù)目，用藥的三組的白細(xì)胞數(shù)均要少于模型組。 4.BALF中的總蛋白含量可反映肺損傷程度。本次實(shí)驗(yàn)中，模型組的總蛋白含量增加，C類治療組

11、蛋白含量明顯低于模型組。 5.小鼠肺病理切片HE染色觀察到，模型組小鼠有明顯的肺組織結(jié)構(gòu)改變，C類治療組和A類治療組的肺組織病變程度均要低于模型組，B類治療組與模型組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.臭氧攻擊能引起小鼠發(fā)生氣道炎癥反應(yīng)、氣道高反應(yīng)和肺組織病理改變。臭牡丹總提物能夠減輕臭氧攻擊所造成氣道與肺泡病理改變，炎癥反應(yīng)及氣道高反應(yīng)。 2.含臭牡丹藥物的小鼠血清可能具有促進(jìn)支氣管上皮細(xì)胞增殖的作用。