質(zhì)譜技術(shù)對尿液和羊水代謝物的分析.pdf

1、目的：運(yùn)用質(zhì)譜技術(shù)分析尿液和羊水代謝物。建立氣相色譜-質(zhì)譜檢測新生兒尿液中類固醇激素方法，以應(yīng)用于先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥等類固醇激素代謝異常相關(guān)疾病的診斷和鑒別診斷；運(yùn)用氣相色譜-質(zhì)譜和串聯(lián)質(zhì)譜建立羊水中有機(jī)酸代謝物、?；鈮A和氨基酸的參考值，為有機(jī)酸血癥的羊水產(chǎn)前診斷提供依據(jù)。 方法：①建立氣相色譜-質(zhì)譜檢測尿液中類固醇激素的方法：尿液首先用固相萃取柱萃取游離型和結(jié)合型類固醇激素，然后經(jīng)β-葡萄糖醛酸苷酶和硫酸酯酶水解，再次用

2、固相萃取柱萃取游離型類固醇激素，加入內(nèi)標(biāo)，吹干并經(jīng)兩次衍生后采用氣相色譜-質(zhì)譜檢測分析。以上述方法檢測10例正常新生兒和5例來自新生兒疾病篩查中心的先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥患兒。②收集新華醫(yī)院產(chǎn)前篩查孕婦羊水共63例。采用氣相色譜-質(zhì)譜檢測分析其有機(jī)酸代謝物：羊水經(jīng)尿素酶水解，乙酸乙酯萃取，雙三甲基硅基三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷衍生后上樣分析；采用串聯(lián)質(zhì)譜檢測分析羊水中氨基酸和?；鈮A：將羊水滴于濾紙片上，取直徑3mm的羊水濾紙片4片，經(jīng)含

3、酰基肉堿和氨基酸同位素內(nèi)標(biāo)的甲醇萃取，鹽酸正丁醇衍生后上樣分析。所有樣本按照孕周：18孕周之前和18孕周之后分為兩組，對兩組中每一種化合物進(jìn)行了Mann-Whitney U檢驗(yàn)。所有樣本按照年齡：35歲之前和35歲之后分為兩組，對兩組中每一種化合物進(jìn)行了Mann-Whitney U檢驗(yàn)。通過統(tǒng)計(jì)分析建立羊水中有機(jī)酸代謝物、氨基酸和酰基肉堿參考值。 結(jié)果：⑴氣相色譜-質(zhì)譜檢測尿液中的3種類固醇激素17-HP、16α-OH-DHEA

4、和6α-OH-THA的相關(guān)系數(shù)在0.9876~0.9997之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均＜9.2％，回收率在91％~111％之間。10例正常新生兒尿液的17-HP、16α-OH-DHEA和6α-OH-THA水平分別是102±8.98、30080±44.21和203±16.36 μg/g Creat。5例先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥患兒尿液的17-HP、16α-OH-DHEA和6α-OH-THA水平分別是8624±36.23，70002±26.51和7±

5、6.26 μg/g Creat；氣相色譜-質(zhì)譜檢測先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥患兒3種類固醇激素水平和正常新生兒有顯著性差異。⑵氣相色譜-質(zhì)譜檢測羊水中131種有機(jī)酸代謝物并建立了參考值；串聯(lián)質(zhì)譜檢測羊水中8種酰基肉堿和12種氨基酸并建立了參考值。 結(jié)論：①氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行尿液類固醇激素分析，有較高的回收率，能夠達(dá)到較高的精確性。建立了檢測尿液類固醇激素的方法，能夠明確區(qū)分正常新生兒和先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥患兒，對臨床鑒別診斷有