增強型體外反搏(EECP)對冠心病患者干-祖細胞動員及其大動脈彈性功能的影響.pdf

1、冠心病是常見且多發(fā)性疾病，雖然治療藥物不斷研制推出，介入治療和外科手術(shù)不斷進步，但冠心病的治療仍然是當前和未來醫(yī)療畫臨的棘手問題。冠心病的本質(zhì)是動脈血管病變，血管結(jié)構(gòu)與功能的改善是治療冠心病的關(guān)鍵。干/祖細胞具有自我更新和分化潛能，能夠產(chǎn)生高度分化的功能細胞，作為重要的修復因子在機體的損傷修復中起重要作用。但冠心病患者外周血中的干/祖細胞數(shù)量顯著下降，且與心血管危險因素呈高度負相關(guān)，因此提高冠心病患者外周血中的干/祖細胞數(shù)量，對冠心病的

2、治療具有積極作用。干/祖細胞治療為冠心病患者帶來了希望。干/祖細胞移植治療冠心病取得了令人鼓舞的結(jié)果，但目前還處于起步階段，與臨床推廣還有很大一段距離。因而動員自身的干/祖細胞的研究日益受到關(guān)注。EECP是一項安全無創(chuàng)的冠心病治療方式，在開通冠狀動脈側(cè)支循環(huán)、改善血管內(nèi)皮功能方面扮演了重要角色，EECP能否動員患者自身的干/祖細胞?動員的干/祖細胞能否改善冠心病患者的血管功能?這方面的研究國內(nèi)外少見報道。
　　 動脈硬化是心血管

3、疾病的重要危險因素，脈搏波傳導速度(PWV)是評價大動脈硬度的經(jīng)典測量指標，是大動脈結(jié)構(gòu)與功能異常的總體反映，EECP能否改善冠心病患者的肱-踝動脈PWV(baPWV)目前還未見報道。
　　 本課題重點探討EECP對冠心病患者干/祖細胞動員的作用以及干/祖細胞動員與血管內(nèi)皮功能改善的關(guān)系；探討EECP對冠心病患者肱-踝動脈PWV(baPWV)的影響。通過本研究，不僅為EECP治療機制的闡明奠定了基礎(chǔ)，也為冠心病患者提高自身循環(huán)干

4、/祖細胞數(shù)量找到一種途徑，也為EECP更廣泛的臨床治療應用提供理論依據(jù)。
　　 全文包括三個部分：
　　 第1部分 EPC-CFU的培養(yǎng)
　　 1.1目的:
　　 從冠心病患者的外周血分離培養(yǎng)EPC-CFU；建立穩(wěn)定可靠的EPC-CFU培養(yǎng)體系，從而為下一步研究EECP對EPC-CFU的影響奠定基礎(chǔ)。
　　 1.2方法:
　　 1.2.1.外周血單個核細胞的分離。
　　 1.2.2

5、.外周血EPC-CFU的培養(yǎng)。
　　 1.2.3. EPC-CFU的鑒定。
　　 1.3結(jié)果:
　　 1.3.1. EPC-CFU的培養(yǎng)
　　 培養(yǎng)的EPC-CFU的中間是一簇圓形的細胞，周圍有許多細而平的長梭形細胞放射出來。
　　 1.3.2. EPC-CFU的鑒定
　　 培養(yǎng)的EPC-CFU用Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1進行染色，雙染陽性細胞被認為是EPC-CFU。并以C

6、D31對培養(yǎng)細胞進行免疫熒光染色，進一步確定其內(nèi)皮細胞特性。
　　 1.4結(jié)論:
　　 1.4.1.成功地從冠心病患者外周血中分離培養(yǎng)出EPC-CFU，為下一步的實驗奠定了基礎(chǔ)。
　　 第2部分EECP對冠心病患者干/祖細胞的動員及其機制探討
　　 2.1目的:
　　 研究EECP對冠心病患者EPC-CFU、CD133+細胞、CD34+細胞和CD34+CD133+細胞的動員以及對干細胞動員相關(guān)因子

7、G-CSF、VEGF、HGF的影響；分析探討這些干/祖細胞的數(shù)量變化、干細胞動員相關(guān)因子水平的變化與肱動脈血流介導的舒張功能(FMD)改善的相關(guān)關(guān)系；分析探討這些干/祖細胞的數(shù)量變化與干細胞動員相關(guān)因子水平變化的相關(guān)關(guān)系。
　　 2.2方法:
　　 2.2.1.體外反搏，由中山一院反搏室的工作人員操作。反搏36小時，每天1小時，每周5-6次。
　　 2.2.2.培養(yǎng)EPC-CFU，EECP前后觀察EPC-CFU的

8、數(shù)目，并進行統(tǒng)計學分析。
　　 2.2.3.流式檢測EECP前后外周血CD133+細胞、CD34+細胞和 CD34+CD133+細胞的數(shù)目。
　　 2.2.4.液相芯片和ELISA檢測EECP前后外周血干細胞動員相關(guān)因子 G-CSF、VEGF和HGF的水平。
　　 2.2.5.超聲檢測EECP前后肱動脈FMD。
　　 2.2.6.分析這些干/祖細胞數(shù)量的變化、干細胞動員相關(guān)因子水平的變化與內(nèi)皮功能改善的相

9、關(guān)關(guān)系以及這些干/祖細胞的數(shù)量變化與干細胞動員相關(guān)因子水平變化的相關(guān)關(guān)系。
　　 2.3結(jié)果:
　　 2.3.1.EECP對EPC-CFU的數(shù)目的影響 EECP治療后EPC-CFU的數(shù)量顯著升高。
　　 2.3.2.EECP對CD133+、CD34+和CD34+CD133+干/祖細胞的數(shù)量的影響
　　 EECP治療后CD133+細胞、CD34+細胞的數(shù)量明顯升高，而對CD34+CD133+數(shù)量沒有明顯的影

10、響。
　　 2.3.3.EECP對干細胞動員相關(guān)因子的影響
　　 EECP治療后G-CSF和HGF的水平明顯升高，而對VEGF的水平?jīng)]有明顯的影響。
　　 2.3.4.EECP對FMD的影響 EECP治療后FMD明顯改善。
　　 2.3.5.干/祖細胞的數(shù)量變化與FMD改善的相關(guān)關(guān)系
　　 EPC-CFU的數(shù)量增加與FMD的改善呈顯著正相關(guān)；CD133+細胞數(shù)量的增加與EECP前后FMD的改善呈正

11、相關(guān)關(guān)系;CD34+細胞數(shù)量的增加與EECP前后FMD的改善無相關(guān)關(guān)系。
　　 2.3.6.干細胞動員相關(guān)因子的變化與FMD改善的相關(guān)關(guān)系
　　 HGF水平的增加與FMD的改善呈顯著正相關(guān)；而G-CSF水平的增加與EECP前后FMD的改善無相關(guān)關(guān)系。
　　 2.3.7.干/祖細胞的數(shù)量變化與干細胞動員相關(guān)因子水平變化的相關(guān)關(guān)系
　　 EPC-CFU、CD133+細胞、CD34+細胞的數(shù)量增加與HGF、G-

12、CSF水平的增加均無相關(guān)關(guān)系。
　　 2.4結(jié)論:
　　 2.4.1.EECP能顯著增加外周血中EPC-CFU、CD133+細胞、CD34+細胞的數(shù)量。
　　 2.4.2.EECP能顯著增加外周血中G-CSF和HGF的水平。
　　 2.4.3.外周血中EPC-CFU數(shù)量的增加與EECP前后FMD的改善呈顯著正相關(guān)，外周血中CD133+細胞數(shù)量的增加與EECP前后FMD的改善呈正相關(guān)關(guān)系。
　　 2

13、.4.4.外周血中HGF數(shù)量的增加與EECP前后FMD的改善呈顯著正相關(guān)。
　　 第3部分EECP對冠心病患者大動脈彈性功能的影響
　　 3.1目的:
　　 研究EECP對冠心病患者肱-踝動脈PWV(baPWV)的作用。
　　 3.2方法:
　　 3.2.1.體外反搏，由中山一院反搏室的工作人員嚴格按照反搏裝置說明書進行。反搏36小時，每天1小時，每周5-6次。
　　 3.2.2.大動脈彈

14、性功能的測定：使用全自動動脈硬化診斷裝置進行baPWV的測量，同時檢測患者的ABI、血壓、心率、脈壓等指標。
　　 3.3結(jié)果;
　　 3.3.1. EECP對收縮壓、脈壓、心率的影響
　　 EECP前后收縮壓、脈壓、心率的變化均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 3.3.2. EECP對ABI的影響
　　 EECP前后ABI的變化均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 3.3.3. E