同種異體BMSC對(duì)EAT的療效及CD4+CD25+Treg細(xì)胞影響的研究.pdf

1、目的：1.利用C57BL/6小鼠及甲狀腺球蛋白(Thyroglobulin，Tg)建立自身性免疫性甲狀腺炎(Autoimmune Thyroiditis，AIT)小鼠模型-EAT模型。
　　2.采用骨實(shí)質(zhì)分離培養(yǎng)法獲得。Balb/c健康小鼠P3代骨實(shí)質(zhì)間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Mesenchymal stem cells，BMSC)，并對(duì)EAT小鼠應(yīng)用BMSC進(jìn)行尾靜脈注射治療，通過對(duì)治療組及對(duì)照組血清TT3、TT4、TPOAb、T

2、mAb、TgAb及甲狀腺病理結(jié)果進(jìn)行分析，初步探討MSC對(duì)EAT的治療效果。
　　3.通過比較3組的CD4+CD25+Treg細(xì)胞頻數(shù)的差異探討EAT的相關(guān)發(fā)病機(jī)理及MSC控制自身免疫反應(yīng)的作用機(jī)制。
　　方法：1.采用骨實(shí)質(zhì)分離培養(yǎng)法獲得Balb/c小鼠P3代BMSC，以流式分析其免疫表型。
　　2.36只雌性5周齡C257BL/6小鼠，體重(20±1)g，隨機(jī)平均分成3組，A組BMSC治療組，B組為模型對(duì)照組，C組

3、為為正常對(duì)照組，于第0天時(shí)予A組及B組每只小鼠豬甲狀腺球蛋白(porcine Thyroglobulin，pTg)與完全性弗氏佐劑(FreundAdjuvant Complete，CFA)等體積混合充分乳化后0.1ml油包水制劑(含pTg150ug)注射于兩后足跖皮下；第14天時(shí)予A組及B組每只小鼠pTg與不完全性弗氏佐劑(Freund Adjuvant Incomplete，IFA)等體積混合充分乳化后0.1ml油包水制劑(含pTg1

4、50ug)注射于腹股溝皮下。并于相同時(shí)間點(diǎn)、部位給予C組等體積的生理鹽水。
　　3.對(duì)A組于第0天、第7天、第14天、第21天進(jìn)行尾靜脈注射濃度為3×106/mlBMSC0.1ml。并于相同時(shí)間點(diǎn)給予B、C組尾靜脈注射相同體積生理鹽水。
　　4.第28天時(shí)摘眼球取血，然后斷頸處死，顯微鏡下觀察甲狀腺組織形態(tài)改變，行外周血流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞頻數(shù)，同時(shí)測(cè)定TT3、TT4、TPOAb、TmAb、Tg

5、Ab等含量。
　　結(jié)果：1.血清TT4水平A、B組低于于C組且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，血清TPOAb、TmAb、TgAb等抗體滴度A、B組明顯高于C組且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，A組、B組及C組血清TT3水平差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.經(jīng)過治療后血清TT4水平A組高于B組且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，血清TPOAb、TmAb、TgAb等抗體滴度A組明顯低于B組且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

6、>　　3.外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞頻數(shù)A、B組低于于C組且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，經(jīng)過治療后CD4+CD25+Treg細(xì)胞頻數(shù)A組高于B組且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.A組、B組及C組外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞頻數(shù)與TPOAb、TmAb、TgAb等含量呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。
　　5.顯微鏡下觀察到C組甲狀腺組織的甲狀腺濾泡發(fā)育成熟，濾泡腔內(nèi)充滿膠質(zhì)，分布均勻，濾泡呈小葉狀排列，小葉

7、周圍有少量纖維組織和血管，未見炎細(xì)胞浸潤(rùn)；A組有6例偶見淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；B組甲狀腺小葉內(nèi)可見小灶性濾泡萎縮，萎縮濾泡不完整，纖維組織增生，9例可見淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　結(jié)論：1.B組TPOAb、TmAb、TgAb等抗體滴度明顯高于C組，且B組甲狀腺小葉內(nèi)可見小灶性濾泡萎縮，萎縮濾泡不完整，纖維組織增生，9例可見淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，提示小鼠EAT模型建立成功。
　　2.經(jīng)過治療后血清TT4水平A組高于B組，血清TPOAb、TmAb、Tg

8、Ab等抗體滴度A組明顯低于B組，顯微鏡下觀察到A組有6例偶見淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；B組淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)9例，BMSC治療后，治療組小鼠甲狀腺自身抗體水平、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度低于未治療。EAT、小鼠，提示MSC對(duì)EAT小鼠具有某種程度治療作用，促進(jìn)甲狀腺組織抵抗免疫誘導(dǎo)損傷。
　　3.外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞頻數(shù)A、B組低于于C組，經(jīng)過治療后A組高于B組，提示MSC治療EAT與CD4+CD25+Treg細(xì)胞有重要關(guān)系，甲狀腺抗體是作為