2型糖尿病腎病大鼠NGAL、CD4+CD25+Treg的表達及Leflunomide干預(yù)后的研究.pdf

1、目的：通過建立2型糖尿病腎病大鼠模型，觀察中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL)、血管內(nèi)皮細胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule，VCAM-1)、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞(CD4+CD25+Treg)表達和腎損害情況以及來氟米特干預(yù)后的變化，從而為臨床上早期診治糖尿病腎病提供理論依據(jù)。
　　 方

2、法：30只健康雄性SD大鼠隨機分成普食組(A組，正常對照組)8只和高糖高脂飲食組22只，喂養(yǎng)4周后，高糖高脂飲食組大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)30mg/kg，3天后隨機血糖≥16.7mmol/L并穩(wěn)定5天為糖尿病腎病(DN)造模成功。最后成DN模型20只，死亡2只。將成模大鼠按隨機數(shù)字表分為2組：模型對照組(B組)、來氟米特干預(yù)組(C組)各10只。C組予以來氟米特(LEF)5mg/kg/d灌胃給藥，A組、B組分別予以等量生理鹽

3、水灌胃。實驗0周、4周末、8周末分別檢測A、B、C三組大鼠體重、血糖、24小時尿蛋白定量及內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)，ELISA檢測各組大鼠血、尿NGAL表達，流式細胞學(xué)檢測CD4+CD25+Treg占CD4+Treg百分比率，8周末處死大鼠，切片行HE、Masson、PASM染色進行光鏡觀察腎臟病理改變，并做病理評分，應(yīng)用免疫組化檢測腎組織中血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)表達。分析血、尿NGAL、CD4+CD25+Treg、VCA

4、M-1與24小時尿蛋白定量、Ccr及病理評分的相關(guān)性，以及血、尿NGAL、CD4+CD25+Treg、VCAM-1等指標之間的相互關(guān)系。
　　 結(jié)果：(1)B組大鼠血、尿NGAL進行性升高，呈時間依賴性。尿NGAL較血NGAL先升高，0周即達顯著差異(P<0.05)，血NGAL升高4周有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；血NGAL4周與尿蛋白呈正相關(guān)(r=0.670，P<0.05)，與內(nèi)生肌酐清除率呈負相關(guān)(r=-0.660，P<0.

5、05)；尿NGAL8周與尿蛋白呈正相關(guān)(r=0.726，P<0.05)，與內(nèi)生肌酐清除率呈負相關(guān)(r=-0.747，P<0.05)；LEF干預(yù)后對血、尿NGAL的表達均無影響(P>0.05)。(2)B組大鼠CD4+CD25+Treg表達進行性降低，4周即達顯著差異(P<0.01)，LEF干預(yù)后CD4+CD25+Treg表達率上升，4周起效，8周時與正常對照組無差異(P>0.05)；CD4+CD25+Treg與尿蛋白呈負相關(guān)(r=-0.6

6、33，P<0.05)，與Ccr呈正相關(guān)(r=0.709，P<0.05)；(3)B組大鼠VCAM-1表達較A組明顯升高(P<0.05)，C組VCAM-1表達降低，但仍高于A組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；(4)B大鼠腎組織病理評分顯著高于A組(P<0.01)，C組LEF干預(yù)后，病理評分降低，但仍高于A組。病理評分與血NGAL呈正相關(guān)(r=0.811，P<0.05)，與尿NGAL無相關(guān)性，與CD4+CD25+Treg呈負相關(guān)(r=-0

7、.917，P<0.05)；(5)CD4+CD25+Treg表達與血NGAL呈負相關(guān)(r=-0.758，P<0.05)，與尿NGAL無相關(guān)性，與VCAM-1呈負相關(guān)(r=-0.701，P<0.05)。
　　 結(jié)論：(1)尿NGAL在DN早期呈高表達，是檢測早期DN腎小管損害的敏感指標；血NGAL進行性升高，早期與尿蛋白、內(nèi)生肌酐清除率呈相關(guān)性，對評價DN腎小球損害具有重要意義；
　　 (2)2型DN腎組織VCAM-1表達增

8、多，以腎小管表達為主，可能參與糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展；
　　 (3)2型糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展與細胞免疫功能紊亂有關(guān)，隨著病情進展，CD4+CD25+Treg表達進行性下降；
　　 (4)CD4+CD25+Treg與血NGAL呈負相關(guān)，考慮Treg可能通過調(diào)節(jié)炎性細胞影響血NGAL的表達；
　　 (5)LEF干預(yù)治療后能降低DN大鼠VCAM-1表達，升高CD4+CD25+Treg占CD4+Treg百分率，并改善DN