膿毒癥早期大鼠相對(duì)腎上腺皮質(zhì)功能不全及地塞米松干預(yù)的影響.pdf

1、目的：膿毒癥、嚴(yán)重膿毒癥、膿毒癥休克以及相繼出現(xiàn)的多器官功能障礙綜合癥是危重病患者死亡最常見(jiàn)的原因。諸多文獻(xiàn)報(bào)道，伴隨膿毒癥的進(jìn)一步發(fā)展，循環(huán)系統(tǒng)、肝臟、腎臟及胃腸等器官以及內(nèi)皮細(xì)胞的功能相繼受到影響，在這種不利條件下腎上腺的功能也相應(yīng)受到影響。Zaloga報(bào)道危重患者相對(duì)腎上腺皮質(zhì)功能不全的總體發(fā)病率為30％，而膿毒休克患者可達(dá)50％-60％。伴隨腎上腺皮質(zhì)功能不全的發(fā)生是否存在相應(yīng)的器質(zhì)性改變，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)明確報(bào)道。膿毒癥、休克等強(qiáng)應(yīng)

2、激時(shí)腎上腺皮質(zhì)分泌的皮質(zhì)醇增多，但對(duì)于疾病的嚴(yán)重程度而言仍相對(duì)不足。外源性的糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids，GC)可以作用于下丘腦-垂體-腎上腺軸fhvoothalamic-pituitary-adrenal axis，HPAA)的各個(gè)層面，使血漿皮質(zhì)醇濃度上升，從而對(duì)應(yīng)激反應(yīng)起到一個(gè)內(nèi)在的調(diào)節(jié)作用，使機(jī)體通過(guò)多種機(jī)制對(duì)危重病患者起保護(hù)作用。但不同疾病，糖皮質(zhì)激素應(yīng)用的時(shí)間、劑量、療程不同，療效亦各不相同。本研究觀察不同時(shí)間

3、、應(yīng)用相同劑量(小劑量)地塞米松對(duì)膿毒癥早期合并相對(duì)腎上腺皮質(zhì)功能不全的大鼠血清腫瘤壞死因子-a(tumour necrosis factor-a，TNF-a)和白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)生成的影響，并通過(guò)觀察下丘腦、垂體、腎上腺組織的超微結(jié)構(gòu)判斷HPAA的功能不全是否伴隨結(jié)構(gòu)改變，病變?cè)谀膫€(gè)部位，以期為臨床積極治療膿毒癥及膿毒癥休克提供有利的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：動(dòng)物模型采用盲腸結(jié)扎穿孔法(cecal

4、ligation andouncture，CLP、)復(fù)制，小劑量促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone，ACTH)刺激試驗(yàn)評(píng)價(jià)膿毒癥動(dòng)物的腎上腺皮質(zhì)功能。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇健康雄性清潔級(jí)wistar大鼠155只(607123)，體重250～300g，隨機(jī)分為5組：(1)正常對(duì)照組(n=10)；(2)假手術(shù)組(n=25)：僅打開(kāi)腹腔不做CLP；(3)模型組(n=50)：僅做cLP；(4)預(yù)防組(n=50)：CL

5、P術(shù)前即刻腹腔注射地塞米松10mg/kg；(5)治療組(n=20)：cLP術(shù)后7h腹腔注射地塞米松10mg/kg。第(2)、(3)、(4)組設(shè)CLP術(shù)后2h、4h、6h、8h、12h五個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)10只大鼠(假手術(shù)組5只)，第(5)組僅8h、12h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)。所有大鼠均于CLP后6h腹腔注射ACTH 0.8μg/kg，于注射前、注射后30min由頸總動(dòng)脈測(cè)壓管采血，分別記做T<,0>、T<,30>，留取血清，-70℃凍存，采用液

6、相平衡放射免疫分析法(radioimmunoassay，RIA)測(cè)定血清中皮質(zhì)醇含量。同時(shí)，各組大鼠均按時(shí)間點(diǎn)采血，留取血清，-70℃凍存，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)測(cè)定血清中TNF-a和IL-6含量。此外，隨機(jī)選取相同環(huán)境下飼養(yǎng)的正常大鼠2只，模型組、治療組和預(yù)防組12h大鼠各2只于CLP術(shù)后12h應(yīng)用1％多聚甲醛行主動(dòng)脈灌注固定，取下丘腦、垂體、腎上腺做電鏡

7、切片觀察組織超微結(jié)構(gòu)變化。用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，各組均數(shù)的比較行兩組獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1 地塞米松干預(yù)對(duì)大鼠血清皮質(zhì)醇含量的影響模型組(13.8±4.4ng/ml)、預(yù)防組(20.8±6.6ng/ml)和治療組(12.6±3.1ng/ml)的T<,0>分別高于正常對(duì)照組(9.8±2.3n∥血)和假手術(shù)組(8.3±2.1ng/m

8、l，(P<0.05)；預(yù)防組T<,0>分別高于模型組和治療組(P<0.05)。 正常對(duì)照組(4.1±1.6ng/ml)和假手術(shù)組(1.7±3.5ng/ml)的△T(TM<,30>-T<,0>)高于模型組(-0.3±3.7ng/ml)、預(yù)防組(-0.2±3.9ng/ml)和治療組(-0.6±2.0ng/ml)(P<0.05)；模型組、預(yù)防組和治療組△T差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 地塞米松干預(yù)對(duì)大鼠血清中TNF-a、IL-6含量

9、的影響模型組中血清TNF-a含量在2h(19.36±4.43pg/ml)達(dá)峰值，以后逐漸下降，IL-6含量在CLP術(shù)后呈逐漸上升趨勢(shì)，峰值出現(xiàn)較TNF-a延后。模型組除8h外，血清TNF-a、IL-6含量均較其余4組明顯升高，模型組和治療組8h時(shí)血清TNF-a、IL-6差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；預(yù)防組血清TNF-a在8h、12h含量低于治療組(P<0.01)，且在各時(shí)間點(diǎn)均不高于假手術(shù)組(P>0.05)。 3 下丘腦、垂體、腎上腺皮質(zhì)

10、電鏡結(jié)構(gòu)改變模型組、預(yù)防組和治療組大鼠下丘腦室旁核細(xì)胞、垂體ACTH細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞均出現(xiàn)脂質(zhì)耗減、髓鞘樣小體以及管泡狀嵴的線粒體嵴和膜部分或全部溶解消失的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)改變，且腎上腺結(jié)構(gòu)改變較下丘腦與垂體變化明顯，以模型組為著。 結(jié)論： 本實(shí)驗(yàn)探討了不同時(shí)間應(yīng)用小劑量地塞米松對(duì)膿毒癥早期合并相對(duì)腎上腺皮質(zhì)功能不全大鼠血清皮質(zhì)醇、TNF-a和IL-6生成的影響，并通過(guò)觀察下丘腦、垂體、腎上腺的電鏡切片判斷HPAA

11、的功能不全是否伴隨結(jié)構(gòu)改變，從而得出以下結(jié)論： 1 膿毒癥早期大鼠即存在相對(duì)腎上腺皮質(zhì)功能不全。 2 合并相對(duì)腎上腺皮質(zhì)功能不全的膿毒癥大鼠血清TNF-a、IL-6均明顯升高。 3 小劑量激素預(yù)防性應(yīng)用能提高T<,0>水平，但對(duì)ACTH刺激試驗(yàn)無(wú)明顯影響。 4 小劑量激素替代治療能有效降低血清TNF-a、IL-6水平，且早期應(yīng)用效果更理想。 5 下丘腦、垂體、腎上腺在膿毒癥存在時(shí)均出現(xiàn)代謝性結(jié)構(gòu)改