TGEV含A、D抗原位點S基因片斷的真核表達(dá).pdf

1、豬傳染性胃腸炎(Transmissiblegastroenteritis，TGE)是由豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)引起豬的一種以嚴(yán)重腹瀉，嘔吐和脫水為主要臨床癥狀的高度接觸性傳染病。該病對2周齡以內(nèi)的仔豬具有高度致病性，致死率高達(dá)100％，是威脅養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要傳染病?？焖贉?zhǔn)確的診斷和有效免疫預(yù)防是本病防治的主要內(nèi)容。S基因所編碼的S蛋白是唯一誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的結(jié)構(gòu)蛋白。因此，該基因的表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的研究，對TGE特異性免疫預(yù)防及

2、準(zhǔn)確診斷具有重要意義。　　本研究根據(jù)已發(fā)表的TGEVS基因cDNA序列，利用Primer5.0軟件設(shè)計并合成了一對TGEVS基因引物，通過PCR擴(kuò)增出含A、D位點的S1基因，將S1克隆到pMD18-T載體上，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pMD18-T-S1。對pMD18-T-S1進(jìn)行鑒定后，將S1基因亞克隆至pMel-BacC真核表達(dá)載體的HindⅢ和BamHI之間的多克隆位點上，命名為重組表達(dá)載體pMel-BacC-S1。將其與線性桿狀病毒DNA

3、Bac-N-Blue共轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細(xì)胞，通過三輪蝕斑篩選，獲得了重組桿狀病毒。用SDS-PAGE和Western-blot分析表達(dá)產(chǎn)物。結(jié)果表明：S基因在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中獲得表達(dá)，表達(dá)的重組蛋白約為37kDa，光密度掃描對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行初步定量，表明重組蛋白約為菌體總蛋白的8.3％。間接ELISA檢測表明抗TGEV全血清可與目的蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)，說明目的蛋白具有良好的反應(yīng)原性，用目的蛋白免疫的血清可與全病毒發(fā)生特異性反應(yīng)，說明目的蛋