醛固酮對豚鼠心臟電生理影響.pdf

1、心律失常是心血管系統(tǒng)類疾病常見的死亡原因，醛固酮作為“腎素-血管緊張素-醛固酮”系統(tǒng)的重要作用因子，參與機體生理機能以及病理過程的調控。兩個著名的臨床實驗（RALES和EPHESUS）顯示，在利尿劑和血管緊張素轉換酶抑制劑基礎上再加用醛固酮拮抗劑治療可以顯著降低心衰病人心源性猝死的發(fā)生率，提示醛固酮具有潛在的致心律失常作用。
　　 心肌細胞具有鹽皮質激素受體，除參與病理性心肌肥厚、心臟纖維化外，醛固酮尚可調控心肌離子通道蛋白表達

2、水平參與電生理重構。實驗顯示，醛固酮增加Cav1.2mRNA表達水平、從而上調心室肌細胞的L-Ca2+電流，增加Na+通道蛋白密度、增強INa電流，醛固酮還可明顯減少Kv4.2和Kv4.3(Ito)，Kv1.5(IKur)，Kir2.1andKir2.3(IK1)的mRNA轉錄及蛋白表達。上述去極化電流的上調和復極K+電流的下調造成動作電位時程(APD)明顯延長，早后除極（earlyafter-depolarization，EAD）的傾

3、向增加。此外，有實驗表明，醛固酮上調If電流，從而增加心肌細胞的興奮性。
　　 上述結果提示，醛固酮可直接調控心肌離子通道的功能，參與病理情況下心律失常的發(fā)生。然而，以上實驗研究主要局限于小鼠、大鼠等嚙齒類小動物模型。已知心肌電生理存在顯著的種屬差異，上述小動物心臟復極電流以Ito為主，缺少延遲整流鉀電流，而延遲整流鉀電流是包括人類在內的大動物心臟復極重要的電流成分。因此，本實驗研究醛固酮對豚鼠心臟電生理影響，并探討其可能的機制

4、。
　　 實驗在豚鼠皮下植入滲透泵以恒速釋放醛固酮（1μg/h）造模，時間為28天，觀察醛固酮在長期病理濃度下對豚鼠心電圖、乳頭肌動作電位各參數(shù)的影響，并且借助IKr阻斷劑多菲利特、IKs阻斷劑293B及鈉通道阻滯劑雷諾嗪，探索醛固酮影響心臟電生理的可能電流成份。實驗結果將對解釋病理情況下電生理重構機制提供實驗依據(jù)。
　　 目的:觀察醛固酮對豚鼠心臟電生理的影響，并探討可能機制。
　　 方法:
　　 (1

5、)實驗分組:雄性豚鼠32只，體重200-2509，分為四組，即對照組、醛固酮組、螺內酯組、螺內酯與醛固酮合用組。對照組在標準環(huán)境中飼養(yǎng)28天;醛固酮組動物腹腔注射三溴乙醇麻醉(225mg/kg)，將注滿醛固酮溶液(4mg/mL)的滲透壓泵植入豚鼠背部皮下，醛固酮釋放速度為1μg/h，時間為28天;螺內酯組將螺內酯拌在豚鼠食物中，通過口服途徑給藥28天，用量為100mg/kg/day;螺內酯與醛固酮合用組動物植入醛固酮滲透壓泵的同時飼予螺

6、內酯28天。
　　 (2)電生理學參數(shù)測定:于造模前1天、實驗結束日（第28天），在麻醉狀態(tài)下描記所有動物標準Ⅱ導聯(lián)心電圖(ECG)，測量RR間期、QT間期以及ORS波寬等參數(shù)。之后將動物處死，取出左心室乳頭肌，使用標準玻璃電極技術記錄豚鼠乳頭肌動作電位，計算各組動作電位復極化90％時間(APD90)，靜息電位(RP)，有效不應期(ERP)，并觀察各組EAD發(fā)生率。隨后，分別觀察并比較使用IKr阻斷劑多菲利特、IKs阻斷劑293

7、B或鈉離子通道拮抗劑雷諾嗪對對照組和醛固酮組APD的影響，以間接分析可能發(fā)生病理性改變的電流成分。
　　 (3)電解質測定:第25天時使用代謝籠收集豚鼠24小時的尿液，測量排尿量，使用EAAS法檢測尿鈉、鉀濃度。
　　 (4)血壓及心臟的測定:28天后，腹腔注射戊巴比妥鈉(30～35mg/kg)麻醉，通過頸動脈插管測量豚鼠血壓，測完血壓后稱量心臟大小，計算心臟指數(shù)（心臟重量/體重）。
　　 (5)血藥濃度測定:使

8、用醛固酮放射免疫分析藥盒于實驗實驗結束日檢測各組醛固酮血藥濃度。
　　 (6)數(shù)據(jù)處理:實驗數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差表示，組間比較采用兩樣本t檢驗，給藥前后比較采用配對t檢驗，p＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 (1)電生理學參數(shù)測定:
　　 對照組，醛固酮組，螺內酯組以及螺內酯與醛固酮合用組各自的RR間期為:242.7±11.6ms，247.5±10.6ms，251.5±14.7ms，25

9、1±11.3ms，各組數(shù)據(jù)與對照比相比沒有顯著性差異。對照組QT間期以及ORS波寬分別為150.3±5.6ms，30.8±3.1ms，醛固酮組為163.8±8.1ms，36.6±1.9ms，醛固酮組QT間期和QRS波寬明顯大于對照組，具有顯著性差異(p＜0.05)，提示醛固酮能夠延長QT間期和QRS波寬;螺內酯組QT間期以及QRS波寬分別為146.4±6.5ms，28.8±1.8ms，與對照組相比沒有顯著性差異(p＞0.05)，說明螺內

10、酯本身對QT間期和QRS波寬影響較小;螺內酯與醛固酮合用組為145.6±7.1ms，28.2±2.0ms，與醛固酮組相比有顯著性差異(p＜0.05)，表明螺內酯可以拮抗醛固酮的作用。
　　 對照組和醛固酮組APD90分別為192.1±12.9ms，216.2±12.3ms，醛固酮組APD90明顯大于對照組，具有顯著性差異(p＜0.05)，提示醛固酮能夠延長動作電位時程;螺內酯組為191.7±17.5ms，與對照組相比沒有顯著性差

11、異(p＞0.05)，說明螺內酯本身對動作電位影響較小;螺內酯與醛固酮合用組為200.9±13.8ms，螺內酯可以削弱醛固酮的影響，與醛固酮組相比有顯著性差異(p＜0.05)，表明螺內酯可以拮抗醛固酮的作用。
　　 對照組和醛固酮組頻率依賴性(0.2Hz，1Hz，2Hz)分別為(200.5±12.0ms,155.3±19.5ms,121.5±10.4ms),(231.9±16.5ms,182.8±19.8ms,138.8±16.2

12、ms)，較之于對照組，醛固酮組各個頻率的APD90均顯著性延長(p＜0.05)，但隨頻率增大APD90縮短的趨勢沒有改變;螺內酯組與螺內酯與醛固酮合用組的頻率依賴性分別為:(197.3±10.2ms，171.8±4.3ms，125.0±7.2ms)，(205.2±8.4ms，170.0±6.0ms，122.9±16.2ms)，與對照組相比各組各個頻率數(shù)值均沒有顯著性差異(p＞0.05)，說明螺內酯本身對頻率依賴性影響較小，可以拮抗醛固酮

13、延長動作電位的作用。
　　 對照組和醛固酮組有效不應期(ERP)分別為201.5±5.9ms，234.9±12.1ms，醛固酮組ERP明顯大于對照組，具有顯著性差異(p＜0.05)，提示醛固酮能夠延長ERP;螺內酯組為198.3±15.0ms，與對照組相比沒有顯著性差異(p＞0.05)，說明螺內酯本身對ERP影響較小;螺內酯與醛固酮合用組為200.6±12.4ms，在螺內酯作用下減弱了醛固酮的影響，與醛固酮組相比有顯著性差異(p

14、＜0.05)，表明螺內酯可以拮抗醛固酮的作用。
　　 對照組的EAD發(fā)生率為1/15，而醛固酮組的EAD發(fā)生率為5/8，醛固酮組EAD發(fā)生率明顯高于對照組，提示醛固酮可以提高心律失常的發(fā)生率;螺內酯組以及螺內酯與醛固酮合用組的EAD發(fā)生率分別為0/7，1/8，與對照組發(fā)生率相比沒有差別，提示螺內酯本身對心律失常沒有影響，但是可以拮抗醛固酮致心率失常的作用。
　　 給予IKr拮抗劑多菲利特后，對照組和醛固酮組的APD90延

15、長率分別為21.8％，25.9％，二者沒有顯著性差異(p＞0.05)，醛固酮組的IKr通道密度與對照組相比沒有差異，提示醛固酮對IKr通道表達的影響較小。
　　 給予Iks拮抗劑293B后，對照組和醛固酮組的APD90延長率分別為26.6％，4.5％，具有顯著性差異(p＜0.05)，醛固酮組豚鼠心肌細胞中IKs成分明顯多于對照組，提示醛固酮顯著降低了IKs通道的表達。
　　 給予晚鈉離子通道拮抗劑雷諾嗪后，對照組和醛固酮

16、組的APD90縮短率分別為8.0％，8.1％，沒有顯著性差異(p＞0.05)，醛固酮組的晚鈉電流成分與對照組相比沒有差異，提示醛固酮對晚鈉離子通道表達的影響較小。
　　 (2)電解質測定:對照組，醛固酮組的尿鉀濃度為73.6±65.8mmol/L，85.9±42.9mmol/L，二者沒有顯著性差異(p＞0.05);尿鈉濃度為54.6±70.6mmol/L，80.2±14.4mmol/L，沒有顯著性差異(p＞0.05)。對照組，醛

17、固酮組的尿鉀24小時總排泄量為2.13±0.87mmol，2.08±1.28mmol;尿鈉24小時總排泄量為0.94±0.76mmol，1.74±1.18mmol，均沒有統(tǒng)計學差異(p＞0.05)，表明鉀醛固酮組豚鼠體內鈉鉀代謝沒有異常，醛固酮對電解質代謝影響較輕微，提示豚鼠心臟電生理的改變不是電解質異常引起的。
　　 (3)動脈血壓及心臟指數(shù)的測定:對照組，醛固酮組，螺內酯組以及螺內酯與醛固酮合用組各自的平均血壓為:71.2±

18、7.6mmHg，71.5±3.1mmHg，71.8±6.6mmHg，67.2±8.6mmHg，各組的心臟的相對大?。ㄐ呐K/體重）為:4.01±0.68×10-3，4.33±0.36×10-3，3.59±0.14×10-3，3.60±0.37×10-3，各組血壓和心臟指標與對照組相比均沒有顯著性差異(p＞0.05)，說明醛固酮在實驗作用時間及濃度下對血壓及心臟大小沒有影響，提示豚鼠心臟電生理的改變不是血壓升高引起的。
　　 (4)

19、血藥濃度的測定:對照組和醛固酮組血藥濃度為190±44ng/L，554±84ng/L，醛固酮組血藥濃度明顯高于對照組(p＜0.05)，提示滲透壓泵可以恒速將醛固酮釋放到豚鼠體內，螺內酯組以及螺內酯與醛固酮合用組血藥濃度為4118±1568ng/L，7900±1262ng/L，也明顯高于對照組水平(p＜0.05)，提示通過反饋性調節(jié)，螺內酯可以促進豚鼠體內醛固酮的分泌和釋放。
　　 結論:
　　 醛固酮可以影響豚鼠心臟的電