炙甘草湯對豚鼠左心室流出道電生理效應(yīng)的研究.pdf

1、目的：炙甘草湯具有抗多種實驗性心律失常的作用，臨床用于防治心律失常。我院生理教研室實驗研究發(fā)現(xiàn)豚鼠、大鼠、家兔左心室流出道(主動脈前庭)的特定部位存在慢反應(yīng)自律細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)該部位組織學(xué)形態(tài)、電位特征以及0相和4相的離子流基礎(chǔ)與竇房結(jié)起搏細(xì)胞相似。目前發(fā)現(xiàn)，臨床上難以治療的由電解質(zhì)紊亂引起的室顫、早搏、心動過速等心律失常常與心室流出道的結(jié)構(gòu)、形態(tài)和功能異常有關(guān)。實驗室研究發(fā)現(xiàn)電解質(zhì)紊亂影響了左心室流出道慢反應(yīng)自律細(xì)胞的正常功能，其會導(dǎo)致一系

2、列心律失常的發(fā)生。臨床上，電解質(zhì)紊亂如低鉀血癥、低鎂血癥、低鈣血癥等是威脅心臟正常功能并引起多種心律失常的重要因素之一。目前炙甘草湯對豚鼠左心室流出道電生理效應(yīng)的研究在國內(nèi)外尚未見報道，本實驗利用常規(guī)玻璃微電極細(xì)胞內(nèi)記錄技術(shù)觀察了在電解質(zhì)紊亂情況下炙甘草湯對左心室流出道自發(fā)慢反應(yīng)電位的影響，以尋找炙甘草湯抗心律失常作用的根本機制。通過本研究也期望對源于心室流出道的這些特發(fā)性心律失常的發(fā)生提供炙甘草湯臨床預(yù)防和治療的實驗依據(jù)。 方

3、法：利用健康豚鼠的離體心臟，制備左心室流出道(主動脈前庭)標(biāo)本，用O2飽和的改良K-H液恒溫(36±0.5℃)、恒速(10ml/min)灌流，標(biāo)準(zhǔn)玻璃微電極細(xì)胞內(nèi)記錄技術(shù)引導(dǎo)動作電位，微機實時采樣并進行信號分析，記錄不同時間的以下指標(biāo)：最大舒張電位(MDP)、動作電位幅度(APA)、0相最大除極速度(Vmax)、4相自動除極速度(VDD)、復(fù)極50％和90％時間(APD50 and APD90)以及自發(fā)放電頻率(RPF)，分別觀測了在制

4、造了低鉀、高鉀；低鎂、高鎂；低鈣、高鈣實驗條件下，炙甘草湯對離體豚鼠左心室流出道組織自發(fā)慢反應(yīng)電位的影響。實驗分組： (1)炙甘草湯不同濃度對左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響： ①炙甘草湯不同濃度對左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響(n=9)。 (2)炙甘草湯不同濃度對低鉀、高鉀實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響： ①炙甘草湯不同濃度對低鉀實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響(

5、n=9)； ②炙甘草湯不同濃度對高鉀實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響(n=9)。 (3)炙甘草湯不同濃度對低鎂、高鎂實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響： ①炙甘草湯不同濃度對低鎂實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響(n=9)； ②炙甘草湯不同濃度對高鎂實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響(n=9)。 (4)炙甘草湯不同濃度對低鈣、高鈣實驗條件下

6、左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響： ①炙甘草湯不同濃度對低鈣實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響(n=9)； ②炙甘草湯不同濃度對高鈣實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響(n=9)。 結(jié)果： 1.炙甘草湯不同濃度對左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響 1.1 炙甘草湯不同濃度對左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響。用20mg/ml炙甘草湯灌流時，穩(wěn)定10min，和正常對照組相比

7、，各項指標(biāo)均無顯著差異；用40mg/ml炙甘草湯灌流時，穩(wěn)定5min，VDD減慢，和正常對照組相比有顯著差異 (P＜0.05)；用80mg/ml炙甘草湯灌流時VDD，5min時明顯減慢(P＜0.01)，APD50、APD90明顯延長(APD50，P＜0.05；APD90，P＜0.05)，RPF灌流后30sec即開始減慢，5min時減慢至最低值(P＜0.05)，RPF由給藥前的94.53±13.26bmp變?yōu)?4.26±17.33bmp，

8、VDD由給藥前的9.33±1.91 mV/s變?yōu)?.11±0.33 mV/s，并在10min內(nèi)維持在此水平。沖洗25min上述效應(yīng)基本恢復(fù)到正常對照組水平。 2.炙甘草湯不同濃度對低鉀、高鉀實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響 2.1 炙甘草湯不同濃度對低鉀實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響。待正常對照組自發(fā)慢反應(yīng)電位各項指標(biāo)維持相對穩(wěn)定后，采集一組數(shù)據(jù)。再用[K+]為3mmol/L的低鉀K-H灌流液灌流，

9、制造實驗對照組，待實驗對照組自發(fā)慢反應(yīng)電位各項指標(biāo)維持相對穩(wěn)定后，再加入20mg/ml炙甘草湯灌流，穩(wěn)定10min，和實驗對照組相比各項指標(biāo)均無顯著差異；用40mg/ml炙甘草湯灌流時MDP絕對值明顯減小(P＜0.05)，APD50、 APD90明顯延長(APD50，P＜0.05；APD90，P＜0.05)，VDD明顯減慢(P＜0.05)；用80mg/ml炙甘草湯灌流時MDP絕對值、APA明顯減小(MDP，P＜0.05；APA，P＜0.

10、05)，APD50、APD90顯著延長(APD50，P＜0.01；APD90，P＜0.01)，RPF和VDD在灌流1min時開始減慢，5min時顯著減慢(RPF，P＜0.01；VDD，P＜0.01)，并維持相對穩(wěn)定。沖洗25min上述效應(yīng)基本恢復(fù)到正常對照組水平。 2.2 炙甘草湯不同濃度對高鉀實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響。待正常對照組自發(fā)慢反應(yīng)電位各項指標(biāo)維持相對穩(wěn)定后，采集一組數(shù)據(jù)。再用[K+]為10mmol/

11、L的高鉀K-H灌流液灌流，制造實驗對照組，待實驗對照組自發(fā)慢反應(yīng)電位各項指標(biāo)維持相對穩(wěn)定后，再分別加入20mg/ml、40mg/ml、80mg/ml炙甘草湯灌流，穩(wěn)定10min，和實驗對照組相比各項指標(biāo)均無顯著差異。沖洗25min上述效應(yīng)基本恢復(fù)到正常對照組水平。 3.炙甘草湯不同濃度對低鎂、高鎂實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響3.1 炙甘草湯不同濃度對低鎂實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響。待正常對照組自發(fā)慢

12、反應(yīng)電位各項指標(biāo)維持相對穩(wěn)定后，采集一組數(shù)據(jù)。再用[Mg2+]為1.3mmol/L的低鎂K-H灌流液灌流，制造實驗對照組，待實驗對照組自發(fā)慢反應(yīng)電位各項指標(biāo)維持相對穩(wěn)定后，再加入20mg/ml炙甘草湯灌流，穩(wěn)定10min，和實驗對照組相比APA明顯減小(P＜0.05)；用40mg/ml炙甘草湯灌流時MDP絕對值、APA明顯減小(MDP，P＜0.05：APA，P＜0.05)，RPF明顯減慢(P＜0.05)：用80mg/ml炙甘草湯灌流時M

13、DP絕對值、APA明顯減小(MDP，P＜0.05；APA，P＜0.01)，APD50、APD90明顯延長(APD50，P＜0.05；APD90，P＜0.05)，RPF和VDD在灌流1min時開始減慢，5 min時達最慢(RPF，P＜0.01；VDD，P＜0.05)，并維持相對穩(wěn)定。沖洗25min上述效應(yīng)基本恢復(fù)到正常對照組水平。 3.2 炙甘草湯不同濃度對高鎂實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響。待正常對照組自發(fā)慢反應(yīng)電位

14、各項指標(biāo)維持相對穩(wěn)定后，采集一組數(shù)據(jù)。再用[Mg2+]為5mmol/L的高鎂K-H灌流液灌流，制造實驗對照組，待實驗對照組自發(fā)慢反應(yīng)電位各項指標(biāo)維持相對穩(wěn)定后，再分別加入20mg/ml、40mg/ml炙甘草湯灌流，穩(wěn)定10min，和實驗對照組相比各項指標(biāo)無顯著差異；用80 mg/ml炙甘草湯灌流RPF在灌流1min時開始減慢，5 min時達最慢(RPF，P＜0.05)，并維持相對穩(wěn)定。沖洗25min上述效應(yīng)基本恢復(fù)到正常對照組水平。 4

15、 炙甘草湯不同濃度對低鈣、高鈣實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響4.1 炙甘草湯不同濃度對低鈣實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響。待正常對照組自發(fā)慢反應(yīng)電位各項指標(biāo)維持相對穩(wěn)定后，采集一組數(shù)據(jù)。再用[Ca2+]為1.25mmol/L的低鈣K-H灌流液灌流，制造實驗對照組，待實驗對照組自發(fā)慢反應(yīng)電位各項指標(biāo)維持相對穩(wěn)定后，再加入20mg/ml炙甘草湯灌流，穩(wěn)定10min，和實驗對照組相比各項指標(biāo)均無顯著差異；用40mg/m

16、l炙甘草湯灌流時APD50明顯延長(P＜0.05)；用80mg/ml炙甘草湯灌流時APA明顯減小(P＜0.05)，APD50、APD90明顯延長(APD50，P＜0.01：APD90，P＜0.05)，RPF和VDD在灌流1min時開始減慢，3min時達最慢(RPF，P＜0.05；VDD，P＜0.05)，并維持相對穩(wěn)定。沖洗25min上述效應(yīng)基本恢復(fù)到正常對照組水平。沖洗25min上述效應(yīng)基本恢復(fù)到正常對照組水平。 4.2 炙甘草

17、湯不同濃度對高鈣實驗條件下左心室流出道自律細(xì)胞電活動的影響。待正常對照組自發(fā)慢反應(yīng)電位各項指標(biāo)維持相對穩(wěn)定后，采集一組數(shù)據(jù)。再用[Ca2+]為5mmol/L的高鈣K-H灌流液灌流，制造實驗對照組，待實驗對照組自發(fā)慢反應(yīng)電位各項指標(biāo)維持相對穩(wěn)定后，分別加入20mg/ml、40mg/ml、80mg/ml炙甘草湯灌流，穩(wěn)定10min，和實驗對照組相比各項指標(biāo)無顯著差異。沖洗25min上述效應(yīng)基本恢復(fù)到正常對照組水平。 結(jié)論：炙甘草湯可