超表達OsNHX1、AtDREB1A基因獲得抗鹽、耐低溫黑麥草轉(zhuǎn)基因株系.pdf

1、本研究的目的是通過基因工程的方法將水稻OsNHX1和擬南芥AtDREB1A基因轉(zhuǎn)入黑麥草，提高其耐鹽、耐低溫或抗旱能力。 對多年生黑麥草再生及根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化體系研究發(fā)現(xiàn)，6個品種黑麥草種子都能誘導(dǎo)出愈傷組織，通過胚性愈傷組織分化再生植株。但激素及添加濃度對不同品種愈傷組織誘導(dǎo)率及分化率影響顯著。黑麥草種子再生植株的最適激素條件是愈傷組織誘導(dǎo)添加9mg/L 2，4-D，胚性愈傷組織的誘導(dǎo)添加3mg/L 2，4-D，分化過程添

2、加0.1mg/L 2，4-D和0.1mg/L 6-BA。生根培養(yǎng)基不添加任何激素。在最適培養(yǎng)條件下篩選出愈傷誘導(dǎo)率和分化率最高的品種TopGun。 利用建立的根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系將水稻OsNHX1基因、擬南芥AtDREB1A基因轉(zhuǎn)入了多年生黑麥草。 水稻OsNHX1基因轉(zhuǎn)化黑麥草得到4個轉(zhuǎn)基因株系，PCR及Southern blotting鑒定表明，OsNHX1基因成功插入黑麥草基因組中?？果}性鑒定表明，轉(zhuǎn)基因株系比野生型

3、抗鹽能力顯著提高，鹽脅迫下，轉(zhuǎn)基因株系比野生型積累了較高的Na+、K+及Pro含量。 擬南芥AtDREB1A基因轉(zhuǎn)化黑麥草得到的轉(zhuǎn)基因株系與野生型相比，植株生長矮小，葉綠素含量增加，葉色加深。表型發(fā)生明顯改變。而且轉(zhuǎn)基因株系耐低溫能力提高。丙二醛含量測定表明，轉(zhuǎn)基因株系丙二醛含量比對照低，膜系統(tǒng)受傷害程度較輕。 本文利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將OsNHX1和AtDREB1A基因轉(zhuǎn)入多年生黑麥草，獲得了抗鹽、耐低溫能力明顯提