β腎上腺素能受體通路對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的體外作用研究.pdf

1、學(xué)校代碼：10023學(xué)號(hào)：20060110413l腎上腺素能受體通路對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的體外作用研究專業(yè)年級(jí)：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)06級(jí)姓名：劉揚(yáng)導(dǎo)師：趙永強(qiáng)(教授)莊俊玲(副教授)北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院(北京協(xié)和醫(yī)院)血液內(nèi)科完成日期：2014年6月摘要背景和目的兒茶酚胺加速多種腫瘤體外擴(kuò)增，相反，抑制腎上腺素能受體則抑制腫瘤細(xì)胞生長。這在一定程度上解釋了應(yīng)激過度和腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性。兒茶酚胺是否影響多發(fā)性骨髓瘤目前尚無

2、系統(tǒng)報(bào)道。本文主要研究腎上腺素受體信號(hào)系統(tǒng)對(duì)骨髓瘤細(xì)胞、骨髓瘤骨髓基質(zhì)細(xì)胞(刪一MSC)的影響，并初步探討阻斷B腎上腺素能受體對(duì)骨髓瘤細(xì)胞增殖的作用及機(jī)理。材料和方法：體外培養(yǎng)人骨髓瘤細(xì)胞系U266、RPMl8226，反轉(zhuǎn)錄PCR測(cè)定瘤細(xì)胞兒茶酚胺關(guān)鍵酶(酪氨酸羥化酶TH、多巴胺羥化酶D13H)mRNA的表達(dá)。在以下三種條件下應(yīng)用MTS方法分別測(cè)定骨髓瘤細(xì)胞系及對(duì)照組淋巴母細(xì)胞NCI—BL2009的增殖變化：(1)加入給予不同濃度的腎上

3、腺素處理，(2)同時(shí)加入抗腫瘤作用的硼替佐米和腎上腺素，(3)分別加入Q受體激動(dòng)劑及阻斷劑、B受體激動(dòng)劑及阻斷劑，判斷腎上腺素對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用是通過何種受體亞型實(shí)現(xiàn)。進(jìn)一步研究影響細(xì)胞增殖的B受體亞型：應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄PCR鑒定兩種細(xì)胞系表達(dá)13腎上腺素能受體亞型D1、132、133的mRNA水平，比較其表達(dá)量差異，并分別應(yīng)用131、B2受體激動(dòng)劑刺激瘤細(xì)胞后MTS檢測(cè)細(xì)胞增殖變化。進(jìn)而對(duì)B腎上腺素受體通路影響腫瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制進(jìn)行初步探索：

4、(1)腎上腺素及13受體激動(dòng)劑刺激后應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)骨髓瘤細(xì)胞分泌VEGF變化；(2)研究廣譜13受體阻斷劑普萘洛爾對(duì)腫瘤瘤細(xì)胞及對(duì)照組淋巴母細(xì)胞細(xì)胞增殖的影響。MTS法檢測(cè)0400umol／1普萘洛爾作用24、48后細(xì)胞增殖變化，臺(tái)盼蘭對(duì)活細(xì)胞染色計(jì)數(shù)的方法檢測(cè)低濃度普萘洛爾(O50umol／1)長期作用于骨髓瘤細(xì)胞后(16d)活細(xì)胞數(shù)的變化。采用DAPI染核、AnnexinV—PI雙染法評(píng)估細(xì)胞凋亡，同時(shí)采用Caspase3／

5、7、8、9Glo—assay檢測(cè)瘤細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)，采用westernblot免疫印跡方法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bct一2、Bax表達(dá)。第三部分測(cè)定腎上腺素，B受體阻斷劑普萘洛爾對(duì)原代骨髓瘤細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞(MMMSC)的作用。取多發(fā)性骨髓瘤患者抗凝骨髓，CDl38免疫磁珠分選純化骨髓瘤細(xì)胞，同時(shí)分選MMMSC。對(duì)原代骨髓瘤細(xì)胞及BMSC給予不同濃度的腎上腺素、普萘洛爾處理，應(yīng)用二乙酸熒光素(FDA)染料染色檢測(cè)原代細(xì)胞活力變化，應(yīng)用MT