哮喘患者氣道上皮與血漿中IL-25的表達(dá)與誘導(dǎo)痰中嗜酸性粒細(xì)胞水平的關(guān)系.pdf

1、第一部分哮喘患者氣道上皮與血漿中IL-25的表達(dá)與誘導(dǎo)痰中嗜酸性粒細(xì)胞水平的關(guān)系
　　目的：探討哮喘患者氣道上皮及血漿中IL-25的表達(dá)與誘導(dǎo)痰中嗜酸性粒細(xì)胞水平的關(guān)系。
　　方法：經(jīng)纖維支氣管鏡刷檢獲得氣道上皮細(xì)胞，用 Trizol一步法提取 mRNA,用Real-time PCR定量檢測氣道上皮細(xì)胞中IL-25的mRNA表達(dá)。靜脈采血后分離血漿，用 ELISA法檢測血漿中 IL-25的濃度。用高滲鹽水霧化獲得誘導(dǎo)痰，DT

2、T裂解痰液后，濾液離心獲取細(xì)胞沉淀，采用劉氏染液染色后顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞分類計數(shù)。
　　結(jié)果：我們收集了21名正常對照者和43名哮喘患者的肺功能、纖支鏡刷片、誘導(dǎo)痰和外周血標(biāo)本。結(jié)果發(fā)現(xiàn)哮喘患者氣道上皮中及血漿中IL-25表達(dá)高于正常對照組，但存在部分哮喘患者其表達(dá)并沒有明顯增高，我們根據(jù)氣道上皮中IL-25的表達(dá)高低將哮喘組又進(jìn)一步分為了IL-25 high和IL-25 low兩組。分析發(fā)現(xiàn)IL-25 high組誘導(dǎo)痰中的嗜酸性粒

3、細(xì)胞高于IL-25 low組。氣道上皮細(xì)胞IL-25表達(dá)水平高的哮喘患者血漿中 IL-25水平顯著增高，誘導(dǎo)痰中嗜酸性粒細(xì)胞高（>3％）者其血漿中IL-25的水平顯著高于誘導(dǎo)痰中嗜酸性粒細(xì)胞低（≤3%）者。
　　結(jié)論：哮喘患者氣道上皮中IL-25的表達(dá)高者誘導(dǎo)痰中嗜酸性粒細(xì)胞比例增高且血漿中IL-25的水平也增高。嗜酸性粒細(xì)胞型哮喘患者血漿中IL-25濃度高于非嗜酸性粒細(xì)胞型哮喘患者，血漿中IL-25的濃度可能用于預(yù)測氣道的嗜酸性

4、粒細(xì)胞性炎癥。
　　第二部分 CDH26在HDM和IL-13刺激的MLE12小鼠肺上皮細(xì)胞中的表達(dá)
　　目的：探討CDH26在屋塵螨和IL-13刺激的小鼠肺上皮MLE12細(xì)胞中的表達(dá)變化及CDH26-shRNA質(zhì)粒的篩選。
　　方法：采用屋塵螨干預(yù)MLE12細(xì)胞6h，24h，48h后收集細(xì)胞，用Real-time PCR定量檢測 CDH26在不同時間點(diǎn)的基因表達(dá)變化。用 IL-13干預(yù) MLE12細(xì)胞48h后同樣采用R

5、eal-time PCR定量檢測CDH26的表達(dá)。將設(shè)計出的3個CDH26-shRNA質(zhì)粒進(jìn)行擴(kuò)增、提取、測序后，采用Lipofectamine2000的方法轉(zhuǎn)染至MLE12細(xì)胞，6h后再加入刺激因子IL-13，培養(yǎng)48h后收集細(xì)胞采用Real-time PCR定量檢測CDH26的表達(dá)。
　　結(jié)果：屋塵螨干預(yù)MLE12細(xì)胞6h CDH26的表達(dá)無明顯變化，在24h和48h其表達(dá)出現(xiàn)了明顯的升高。IL-13干預(yù)MLE12細(xì)胞48h