不同用量刺蒺藜對小鼠毛囊黑皮素1受體表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景與目的: 色素代謝障礙性皮膚疾?。ㄈ琰S褐斑、白癜風(fēng)），發(fā)病率高，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，臨床缺乏理想療效的關(guān)鍵是有關(guān)色素調(diào)節(jié)的影響因素、作用機(jī)理與規(guī)律未能得到深入的科學(xué)闡述。黑皮素（melanocortin）是來源于前體阿黑皮素（POMC）的神經(jīng)肽類激素，包括a-MSH、ACTH等，主要在腦垂體中產(chǎn)生。皮膚源性黑皮素神經(jīng)肽激素主要是參與調(diào)控皮膚的色素沉著過程，而這種作用又主要是通過MC-1R介導(dǎo)[1]。MC-1R是黑素細(xì)

2、胞合成優(yōu)黑素、暗黑素的關(guān)鍵調(diào)節(jié)物，是調(diào)控皮膚色素沉著的重要基因[2]。在這過程中，酪氨酸酶又是色素合成的關(guān)鍵限速酶。MC-1R的激活或者高表達(dá)會(huì)使酪氨酸酶的合成增加，從而使黑素合成增加。中醫(yī)對色素病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)多是責(zé)之氣血失調(diào)，而提出調(diào)和氣血的治則，主要是祛風(fēng)與活血、補(bǔ)腎法則有機(jī)結(jié)合的方法。近年有關(guān)中醫(yī)藥與色素代謝障礙性疾病研究較多的是局限于觀察單味中藥對酪氨酸酶活性或黑素細(xì)胞增殖的影響，鮮有從MC-1R的角度對其色素代謝機(jī)制進(jìn)行闡明

3、，因而也較少具有實(shí)際應(yīng)用意義。我們以往的初步研究結(jié)果表明刺蒺藜具有雙向調(diào)節(jié)黑素細(xì)胞增殖和酪氨酸酶活性的作用，基于此，我們根據(jù)中醫(yī)臨床使用頻率高，對黑素代謝有調(diào)節(jié)作用的刺蒺藜進(jìn)行了有關(guān)色素代謝的一些研究，觀察不同用量刺蒺藜水提物對C57BL/6J小鼠毛囊MC-1R表達(dá)的影響，初步探討刺蒺藜在皮膚表皮黑素細(xì)胞活化和增殖過程中的作用；為臨床治療色素代謝障礙性皮膚病提供有效的用藥參考和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法與內(nèi)容: 48只C57BL/

4、6J小鼠，隨機(jī)分成4組，每組12只，分別為給予刺蒺藜水提液的3組實(shí)驗(yàn)組和給予蒸餾水的1組對照組，實(shí)驗(yàn)組小鼠預(yù)養(yǎng)2天后，于第3天開始，刺蒺藜生藥材分上午9：00和下午16：00兩次連續(xù)給實(shí)驗(yàn)組小鼠灌服刺蒺藜水提液，兩次給小鼠灌胃各0.5ml，對照組為等量蒸餾水。于第30日上午給藥1小時(shí)后將4組小鼠3%戊巴比妥45mg/Kg腹腔麻醉，常規(guī)固定，剃除背毛，用組織剪剪取2cm×2cm大小皮膚，10%中性甲醛固定備用。 隨機(jī)在每組選擇相同

5、數(shù)量的標(biāo)本，脫蠟至水，抗原修復(fù)后，用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶連接（S-P）常規(guī)染色法檢測MC-1R在表皮的陽性表達(dá)情況，用緩沖液替代第一抗體做陰性對照，用已知陽性切片作為陽性對照。然后將標(biāo)本均用200倍顯微鏡下隨機(jī)選擇20個(gè)視野觀察表皮MC-1R陽性細(xì)胞分布情況，并由JVC彩色攝像頭將細(xì)胞圖像輸入Mias系統(tǒng)拍照。 最后采用二級計(jì)分方法，對表達(dá)MC-1R的陽性細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)分，以正常小黑鼠皮膚為對照，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)

6、計(jì)軟件，各組標(biāo)本之間陽性率采用秩和檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。對實(shí)驗(yàn)結(jié)果加以分析，均以α=0.05，P<0.05時(shí)判為有顯著性差異； 結(jié)果: MC-1的表達(dá)定位于表皮基底部黑素細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞胞漿，為黃色或棕黃色顆粒，MC-1R在正常組小黑鼠皮膚毛囊中呈散在局灶性分布，在試驗(yàn)組呈局灶性或彌漫性分布，在表皮基底層形成棕褐色條帶。MC-1在不同用量刺蒺藜組和正常的小鼠毛囊皮片中均有陽性表達(dá)，但MC-1R在試驗(yàn)組皮片中的表達(dá)與正常對

7、照組皮膚比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004<0.01：X2=13.515）且MC-1R在試驗(yàn)組較正常對照組表達(dá)明顯增強(qiáng)，試驗(yàn)組刺蒺藜用量越高表達(dá)越明顯，高劑量即刺蒺藜用量達(dá)225g時(shí)候表達(dá)最強(qiáng)（平均秩=34.21）。 全文結(jié)論: 1、本實(shí)驗(yàn)所設(shè)計(jì)低中高劑量刺蒺藜都能夠促進(jìn)MC-1R的表達(dá)水平。 2、中高低劑量刺蒺藜未發(fā)現(xiàn)能雙向調(diào)節(jié)黑皮素1受體的表達(dá)。 3、MC-IR在刺蒺藜作用下的表達(dá)可能是通過擴(kuò)增生