蛋白激酶C—核因子-Kappa B信號(hào)傳導(dǎo)通路在妊娠高血壓疾病患者胎盤血管病變機(jī)制中作用的研究.pdf

1、目的妊娠高血壓疾病患者胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷后釋放一系列生長因子及細(xì)胞因子可促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)的合成，但其具體的信息通路不明，本文通過檢測妊娠高血壓疾病患者胎盤組織前膠原Ⅰ、ⅢmRNA及蛋白激酶C-核因子-kappaB(PKC-NF-κB)信息分子蛋白的表達(dá)以及PKC-NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)子癇前期患者臍靜脈血清誘導(dǎo)臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HUASMC)增殖及前膠原Ⅰ、ⅢmRNA表達(dá)中的影響，旨在探討PKC-NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)

2、通路在妊娠高血壓疾病患者胎盤血管病變機(jī)制中的作用。 資料與方法: 1.標(biāo)本來源1)收集同濟(jì)醫(yī)院婦產(chǎn)科住院病人共51例。其中正常足月妊娠剖宮產(chǎn)孕婦10例；妊娠高血壓疾病剖宮產(chǎn)孕婦41例{其中妊娠期高血壓(GH)10例，子癇前期(PE)輕度11例，子癇前期重度20例}，兩組病例在年齡，孕周上無顯著性差異，所有病例均為單胎妊娠，無肝腎疾病、糖尿病、感染、原發(fā)性高血壓及其他心血管疾病史；2)HUASMC原代培養(yǎng)：收集同濟(jì)醫(yī)院婦產(chǎn)

3、科住院病人共100例，其中正常足月妊娠剖宮產(chǎn)孕婦80例；子癇前期剖宮產(chǎn)孕婦20例臍靜脈血各30-50mL制備血清。取正常足月妊娠剖腹產(chǎn)術(shù)病人臍動(dòng)脈平滑肌進(jìn)行培養(yǎng)(組織塊培養(yǎng)法)，取三至五代細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 2.研究方法:1.HE染色測定胎盤組織細(xì)小動(dòng)脈管壁面積占血管總面積的百分比(WA/TA)及細(xì)小動(dòng)脈管腔面積占血管總面積的百分比(VA/TA)；2.RT-PCR測定胎盤組織前膠原Ⅰ、ⅢmRNA含量；3.免疫組化、圖像分析等方法

4、測定胎盤絨毛細(xì)小血管PKC-α及NF-κBp65的表達(dá)及對(duì)絨毛血管病變進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)；4.WesternBlot分析胎盤組織胞膜及胞漿PKC-α、胞漿核因子-kappaB抑制因子(I-κB)及胞核NF-κBp65含量；5.分離與培養(yǎng)臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞；6.加或不加PKC抑制劑多黏菌素B(PMB)作用30分鐘后分別加入PKC激動(dòng)劑12-肉蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)及子癇前期患者臍靜脈血清，培養(yǎng)2h后，WesternBlot測定細(xì)胞胞漿I

5、-κB、胞核的NF-κBp65活性；細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)后，MTT測定細(xì)胞活力，流式細(xì)胞學(xué)測定細(xì)胞周期，RT-PCR測定HUASMC前膠原Ⅰ、ⅢmRNA的表達(dá)。 3.統(tǒng)計(jì)方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間數(shù)據(jù)比較采用方差分析及q檢驗(yàn)。P＜0.01表示差異有顯著性。 結(jié)果:1.HE染色顯示子癇前期胎盤細(xì)小血管管壁增厚、管腔狹窄、管壁纖維素樣壞死、急性粥樣

6、硬化顯著高于對(duì)照組(p＜0.01)；2.子癇前期胎盤細(xì)小血管(WA/TA)較正常妊娠組及妊娠期高血壓明顯增高，差異有顯著性(p＜0.01)；3.RT-PCR結(jié)果顯示子癇前期患者胎盤絨毛組織前膠原ⅠmRNA明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)；4.免疫組化顯示子癇前期患者胎盤絨毛細(xì)小動(dòng)脈(直徑約100μm～200μm)PKC-α及NF-κBp65顯色強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組(＜0.01)；5.WesternBlot結(jié)果顯示子癇前期患者胎盤組織PKC-

7、α及NF-κBp65均明顯高于對(duì)照組，胞漿I-κB明顯低于對(duì)照組(＜0.01)；6.盤絨毛細(xì)小動(dòng)脈管壁PKC-α及NF-κBp65的表達(dá)與細(xì)小動(dòng)脈中膜平滑肌細(xì)胞核密度及胎盤絨毛組織前膠原ⅠmRNA的表達(dá)均呈正相關(guān)；7.PMA組及子癇前期患者血清組HUASMC的胞漿I-κB表達(dá)明顯低于對(duì)照組，胞核NF-κBp65表達(dá)、細(xì)胞活力、前膠原ImRNA的表達(dá)、S及G2/M期細(xì)胞百分比明顯高于對(duì)照組(p＜0.01)，G0+G1期細(xì)胞百分比明顯低于妊

8、娠組(p＜0.01)；8.PMB預(yù)處理可以抑制PMA及子癇前期患者臍靜脈血清引起的NF-κB核轉(zhuǎn)位、細(xì)胞活力、前膠原ⅠmRNA的表達(dá)(p＜0.01)，G0+G1期細(xì)胞百分比明顯增加(p＜0.01)。 結(jié)論：1.前膠原ⅠmRNA的表達(dá)增加在子癇前期患者胎盤血管病變過程中起重要作用。2.子癇前期患者胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷后平滑肌細(xì)胞病變過程中存在PKC-α-NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路；3.子癇前期患者臍靜脈血清可激活臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞PKC