大鼠胰島細(xì)胞移植及ICAM-1-LFA-1在排斥反應(yīng)中作用的初步研究.pdf

1、目的:
　　1、探討STZ建立胰島素依賴型糖尿病(IDDM)大鼠模型的最適合劑量。
　　2、探討胰島細(xì)胞分離、純化以及胰島細(xì)胞移植物質(zhì)量的鑒定方法。
　　3、胰島細(xì)胞移植后,探討細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)/淋巴細(xì)胞相關(guān)功能抗原-1(LFA-1)與移植免疫排斥反應(yīng)的關(guān)系,揭示黏附分子參與移植免疫排斥反應(yīng)的機(jī)理,為黏附分子單克隆抗體(mAb)在實(shí)驗(yàn)研究及臨床的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法:研究分為三部分

2、>　　1、建立大鼠糖尿病動(dòng)物模型:將24只Wistar大鼠隨機(jī)分為兩組,A組(n=12),鏈脲佐菌素(STZ)腹腔內(nèi)注射(55mg/Kg); B組(n=12),STZ腹腔內(nèi)注射(65mg/Kg)。通過觀察注射后靜脈血血糖值、大鼠體重、尿糖及一般活動(dòng)情況的變化,根據(jù)成模標(biāo)準(zhǔn)判斷兩組的成模率。
　　2、成年大鼠胰島細(xì)胞提取、分離及純化:經(jīng)膽總管內(nèi)逆行灌注膠原酶方法消化胰島組織,Ficoll400液梯度離心純化消化產(chǎn)物,獲得胰島細(xì)胞后雙

3、硫腙(DTZ)染色、吖啶橙-碘丙啶(AO-PI)雙染色,結(jié)合糖刺激胰島素釋放試驗(yàn)鑒定胰島細(xì)胞移植物的純度、活率及功能質(zhì)量等。
　　3、ICAM-1/LFA-1與胰島細(xì)胞移植的關(guān)系:12只Wistar糖尿病大鼠分為兩組,同種基因移植組(n=6)(Wistar大鼠胰島細(xì)胞→Wistar大鼠糖尿病動(dòng)物模型);異種基因移植組(n=6),(SD大鼠胰島細(xì)胞→Wistar大鼠糖尿病動(dòng)物模型)。術(shù)前術(shù)后均不用免疫移植劑,經(jīng)門靜脈途徑移植后檢測(cè)靜

4、脈血糖,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ICAM-1/LFA-1的表達(dá),運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)肝臟組織胰島細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化。
　　結(jié)果:
　　1、A組成模率為8.33％,B組成模率為91.67%,差異顯著(P<0.05),B組同A組相比注射STZ后血糖值明顯增高、體重增加明顯減緩,一般情況均較差,A、B兩組死亡率都為零。
　　2、本研究共進(jìn)行的12只胰腺消化,經(jīng)純化后獲得的胰島細(xì)胞數(shù)為400-640個(gè)胰島/胰腺,平均為490士90個(gè)胰島/

5、胰腺,活率在90%以上,純度為80%以上,胰島素釋放試驗(yàn)顯示大鼠胰島細(xì)胞經(jīng)高糖刺激后胰島素分泌是低糖刺激分泌的4.36倍(P<0.05)。表明胰島細(xì)胞功能良好。
　　3、同基因組大鼠經(jīng)胰島細(xì)胞移植術(shù)后血糖值即降至正常,且保持到觀察結(jié)束階段,ICAM-1/LFA-1的表達(dá)同術(shù)前比較,沒有顯著性差異。異基因組術(shù)后血糖值也降至正常,但7-9天后血糖均值逐漸回升并于第21天時(shí)升至術(shù)前水平。術(shù)后ICAM-1/LFA-1表達(dá)水平不僅較術(shù)前明顯

6、增高,P<0.05,有顯著性差異,與同基因移植組同時(shí)間段相比較也差異顯著(P<0.05)。第21天肝臟病理切片及免疫組化結(jié)果顯示異基因移植物逐漸喪失正常形態(tài)及功能,與血糖值、ICAM-1/LFA-1表達(dá)水平變化趨勢(shì)呈一致性。
　　結(jié)論:
　　1、STZ是目前建立胰島素依賴型糖尿病大鼠動(dòng)物模型的最適合藥物之一,應(yīng)用65mg/Kg的劑量具有成模率高、死亡率低等優(yōu)點(diǎn)。
　　2、經(jīng)膽總管逆行注入消化酶,Ficoll400梯度離