熱休克蛋白70對苯致小鼠骨髓干細(xì)胞毒作用的研究.pdf

1、熱休克或應(yīng)激蛋白(heatstressorstressproteins，Hsps)是在體內(nèi)外不良因素包括物理因素、化學(xué)因素、生物因素、環(huán)境中的應(yīng)激因素等誘導(dǎo)合成的的一類重要的生物活性分子，其主要生物學(xué)功能包括賦予細(xì)胞或生物從各種應(yīng)激中恢復(fù)的能力和保護(hù)它們免遭這些應(yīng)激因素的損害；更重要的是，作為分子伴侶可以促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成、折疊、裝配、運輸，還參與變性蛋白質(zhì)的清除等。Hsps根據(jù)分子量大小分為多個家族，如HSP100、HSP90、HSP7

2、0、HSP60、小分子量Hsps(smallheatshockproteins，22-23kDa)和泛素(7-8kDa)幾個家族，其中HSP70是目前研究最為廣泛、深入的蛋白質(zhì)，其家族成員最多(共有21種蛋白質(zhì))，而且功能也最為重要。 苯是工農(nóng)業(yè)上廣泛應(yīng)用的化學(xué)物質(zhì)，長期接觸可導(dǎo)致骨髓和遺傳損害，血像的檢查可見白細(xì)胞、血小板減少和全血細(xì)胞減少，嚴(yán)重時可發(fā)生再生障礙性貧血，甚至白血病。1982年，國際腫瘤研究機(jī)構(gòu)確認(rèn)苯是人類致白血

3、病因子。我國苯作業(yè)工人多達(dá)200多萬，絕大部分苯作業(yè)場所空氣苯濃度都處于有害水平，加上在汽車尾氣、香煙霧等大氣污染物中均含有苯，許多外國學(xué)者將苯稱之為“無所不在的污染物”。因此，如何認(rèn)清苯的具體毒作用機(jī)制，進(jìn)而采取有效措施預(yù)防苯的毒作用具有重要價值。近年來研究表明Hsp70在細(xì)胞保護(hù)中起重要作用，如Hsp70的增加可以提高細(xì)胞在致死性溫度下的存活率，并提高其應(yīng)激耐受能力，同時對某些化學(xué)性代謝產(chǎn)物的毒作用過程中有一定的對抗作用，而且Hsp

4、70水平的增加可以抑制抗癌藥物所致的細(xì)胞凋亡。但是，目前還不清楚Hsp70蛋白表達(dá)與苯致細(xì)胞毒性之間的關(guān)系。本研究通過原代細(xì)胞培養(yǎng)，采用Westernblot、MTT比色試驗和流式細(xì)胞術(shù)等實驗方法，分析Hsp70在苯對小鼠骨髓干細(xì)胞毒性中的作用，為進(jìn)一步闡明Hsp70的生物學(xué)意義和苯的防治提供科學(xué)依據(jù)。本研究共分二部分。 第一部分苯致小鼠骨髓干細(xì)胞毒作用Hsp70表達(dá)的研究 本部分取小鼠骨髓干細(xì)胞，體外37℃，5％CO2

5、孵箱中孵育過夜。將細(xì)胞于40℃水浴受熱0-90min，于37℃恢復(fù)1h，用Westernblot方法檢測細(xì)胞Hsp70表達(dá)水平。另取細(xì)胞分組為：染毒組，以不同濃度(0、2、10、50mmol/L)的苯染毒2h；熱應(yīng)激染毒組，細(xì)胞經(jīng)40℃受熱1h，37℃恢復(fù)1h，再以不同濃度(0、2、10、50mmol/L)苯染毒2h。應(yīng)用MTT比色試驗檢測細(xì)胞活性。結(jié)果表明：小鼠骨髓干細(xì)胞受熱應(yīng)激30min后，HSP70輕度增加，而應(yīng)激60，90min

6、后，HSP70明顯升高；熱應(yīng)激染毒組細(xì)胞用2，10mmol/L苯染毒2h后，其細(xì)胞活性較染毒組高。而在0，50mmol/L苯作用下其細(xì)胞活性又低于染毒組。結(jié)果提示HSP70的增加可以提供一定程度的毒物耐受能力或細(xì)胞保護(hù)功能。 第二部分Hsp70在苯致小鼠骨髓細(xì)胞凋亡中的作用本部分取小鼠骨髓細(xì)胞，體外37℃，5％CO2孵箱中孵育過夜后，隨機(jī)分為：染毒組，以不同濃度(0、2、10mmol/L)的苯染毒2h;熱應(yīng)激染毒組，細(xì)胞在40℃