硫酸鎳對小鼠精原細胞毒作用的實驗研究.pdf

1、目的：初步建立小鼠精原細胞體外分離、純化及培養(yǎng)的實驗方法,并探討硫酸鎳對小鼠精原細胞的毒作用。
　　 方法：選擇健康昆明種6～8天雄性小鼠,摘取睪丸組織,采用組合酶消化法制備小鼠睪丸細胞懸液,Percoll不連續(xù)密度梯度法分離精原細胞,貼壁培養(yǎng)進一步純化精原細胞,用堿性磷酸酶染色鑒定。分離純化的精原細胞繼續(xù)培養(yǎng),至生長狀態(tài)良好時,用25、50、100、200、400、800μ mol/L硫酸鎳染毒,以染毒后6h、12h、24h、

2、36h為觀察終點,用MTT法和乳酸脫氫酶(LDH)法檢測鎳對小鼠精原細胞的毒作用；采用透射電鏡觀察硫酸鎳染毒后精原細胞超微結構的變化。
　　 結果：用組合酶消化和Percoll不連續(xù)密度梯度法,分離6-8d小鼠的精原細胞,可以獲得純度較高、基本滿足體外實驗要求的精原細胞；MTT結果顯示,隨著染毒濃度的增加和染毒時間的延長,10μmol/L鎳染毒6h細胞生長抑制(P＜0.05),在6h、12h、24h、36h都存在劑量-效應,在2

3、5、50、100、200、400、800μ mol/L的濃度下都存在時間-效應關系,其染毒24小時IC50為48μmol/L,染毒36小時IC50為42μmol/L。隨著染毒濃度的增加和染毒時間的延長,100μmol/L鎳染毒6h細胞溶解液LDH活力開始降低(P＜0.05),并呈現(xiàn)出劑量依賴性和時間依賴性；透射電鏡可見,精原細胞的超微結構發(fā)生了變化,隨著染毒劑量和染毒時間的延長,出現(xiàn)細胞皺縮,細胞膜破裂,大量內(nèi)容物外溢,細胞器嚴重破壞,