小檗堿與梓醇及其配伍改善胰島素抵抗的研究.pdf

1、目的：通過觀察比較小檗堿與梓醇及其配伍對胰島素抵抗（IR）脂肪細胞葡萄糖攝取和利用的影響，對前脂肪細胞增殖與分化以及這一過程中對PPARγmRNA表達及脂質(zhì)積聚的影響，從藥效學及藥理學途徑初步探討千金黃連丸方劑配伍的科學內(nèi)涵，以及中藥與PPARγ激活劑改善IR的異同性。
　　 方法：
　　 第一部分、小檗堿與梓醇及其配伍對IR 3T3-L1脂肪細胞的影響。
　　 采用地塞米松（1mM）誘導IR脂肪細胞模型，將IR

2、脂肪細胞分為模型組及藥物干預組（分別給與羅格列酮、小檗堿、梓醇、小檗堿＋梓醇進行干預），另設正常脂肪細胞對照組。在含或不含10nmol/L胰島素條件下干預48h，以葡萄糖氧化酶法檢測培養(yǎng)液中葡萄糖消耗量，以2-脫氧-3H-D-葡萄糖攝入法觀察葡萄糖的轉(zhuǎn)運率。
　　 第二部分、小檗堿與梓醇及其配伍對3T3-L1前脂肪細胞增殖和分化的影響。
　　 1.小檗堿與梓醇及其配伍對3T3-L1前脂肪細胞增殖的影響培養(yǎng)3T3-L1前脂

3、肪細胞，待細胞生長達到70%融合時，將其分為羅格列酮、小檗堿、梓醇、小檗堿＋梓醇干預組，另設空白對照組，采用四甲基偶氮唑鹽（MTT）方法檢測3T3-L1前脂肪細胞的增殖。
　　 2.小檗堿與梓醇及其配伍對3T3-L1前脂肪細胞糖代謝和分化的影響 培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細胞并誘導分化，將分化成熟的脂肪細胞分為羅格列酮、小檗堿、梓醇、小檗堿＋梓醇干預組，另設空白對照組，以葡萄糖氧化酶法檢測藥物干預后培養(yǎng)液中葡萄糖消耗量，并以油紅O染

4、色檢測細胞分化過程中胞漿脂質(zhì)的堆積，以RT-PCR檢測這一過程中PPARγmRNA的表達。
　　 結果：
　　 第一部分、小檗堿與梓醇及其配伍對IR 3T3-L1脂肪細胞的影響。
　　 1.小檗堿與梓醇及其配伍對IR 3T3-L1脂肪細胞葡萄糖消耗的影響。含或不含10nmol/L胰島素條件下，藥物處理48小時后，IR模型組葡萄糖的消耗較正常對照組顯著減少（P<0.01）；與模型組比，羅格列酮、小檗堿、梓醇及其配伍

5、組葡萄糖消耗量增加（P<0.05，P<0.01），其中，羅格列酮組在含胰島素條件下葡萄糖消耗較不含胰島素條件下顯著增高，而各中藥組作用有無胰島素的存在條件下均極顯著增高。此外，小檗堿+梓醇組效應優(yōu)于小檗堿、梓醇單藥組（P<0.01）。
　　 2.小檗堿與梓醇及其配伍對IR 3T3-L1脂肪細胞葡萄糖轉(zhuǎn)運的影響。含或不含10nmol/L胰島素條件下，藥物處理48小時后，IR模型組葡萄糖轉(zhuǎn)運率較正常對照組顯著降低（P<0.01）；與

6、模型組比，羅格列酮、小檗堿、梓醇及其配伍組葡萄糖轉(zhuǎn)運率增加（P<0.01），其中，羅格列酮組在含胰島素條件下葡萄糖轉(zhuǎn)運較不含胰島素條件下顯著增高，而在含或不含胰島素條件下，小檗堿、梓醇及其配伍干預后葡萄糖轉(zhuǎn)運都得到顯著提高（P<0.01），小檗堿+梓醇組效應優(yōu)于小檗堿、梓醇單藥組（P<0.01）。
　　 第二部分、小檗堿與梓醇及其配伍對3T3-L1前脂肪細胞增殖和分化的影響。
　　 1.小檗堿與梓醇及其配伍對3T3-L1

7、前脂肪細胞增殖的影響。與空白對照組比較，小檗堿組前脂肪細胞MTT值增加（P<0.05），而小檗堿加梓醇組、梓醇組、羅格列酮組均無差異。
　　 2.小檗堿與梓醇及其配伍對3T3-L1前脂肪細胞糖代謝和分化的影響。小檗堿，梓醇及其配伍組均能顯著增加成熟脂肪細胞的葡萄糖消耗（P<0.01）；小檗堿組及配伍組處理脂肪細胞胞漿脂質(zhì)堆積明顯低于空白對照組（P<0.01），而羅格列酮組細胞胞漿脂質(zhì)堆積明顯高于空白對照組（P<0.01），梓醇組

8、與空白對照組無差異。
　　 3.小檗堿與梓醇及其配伍對3T3-L1脂肪細胞PPARγmRNA的表達的影響。與空白對照組相比，羅格列酮組脂肪細胞PPARγmRNA表達增多（P<0.01），小檗堿組及小檗堿+梓醇組PPARγmRNA表達減少（P<0.05，P<0.01），梓醇組與空白對照組無差異。
　　 結論：
　　 1.小檗堿、梓醇及其配伍均能增加IR脂肪細胞的葡萄糖消耗和轉(zhuǎn)運，其作用不依賴胰島素的存在，提示上述中