2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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文檔簡介

1、嗜線蟲致病桿菌Xenorhabdus nematophila HB310(Xn HB310)屬于腸桿菌科(Enterobacteriaceae)，與小卷蛾斯氏線蟲（Steinernema carpocapsae）HB310共生。前期研究發(fā)現(xiàn)Xn HB310具有廣譜的殺蟲和抑菌活性，該菌在離體培養(yǎng)過程中能產(chǎn)生多種殺蟲毒素和抑菌活性物質(zhì)，其中包括幾丁質(zhì)酶。為了明確共生菌中幾丁質(zhì)酶的特性和功能，本研究根據(jù)GenBank中已知基因chi60（登

2、錄號:KC701470）和chi70（登錄號:KC701471）序列，設(shè)計引物克隆獲得目的基因并進行原核表達，并對表達重組蛋白的生物活性進行了研究?，F(xiàn)將主要結(jié)果總結(jié)如下:
　　1、構(gòu)建chi60基因和chi70基因的原核表達載體pET-28a-chi60和pET-28a-chi70。將其轉(zhuǎn)入到表達感受態(tài)Escherichia coli Transetta(DE3)中，成功表達出重組蛋白Chi60和Chi70。對原核表達的誘導(dǎo)條件進

3、行優(yōu)化，chi60在37℃、30℃、28℃、25℃和16℃條件下的表達產(chǎn)物都以包涵體沉淀的形式存在，IPTG濃度為0.5mM時，包涵體表達量最高;chi70在誘導(dǎo)溫度為28℃、IPTG濃度為0.5mM時，可以表達出大量的可溶性重組蛋白。
　　2、利用DNS法對重組蛋白Chi60和Chi70活性進行檢測，結(jié)果表明，在42℃，重組蛋白Chi60和Chi70的外切幾丁質(zhì)酶活性分別為0.71U/mL和1.59U/mL，內(nèi)切幾丁質(zhì)酶活性為分

4、別29.66U/mL和44.93U/mL，表明這兩種幾丁質(zhì)酶都是內(nèi)切幾丁質(zhì)酶。重組幾丁質(zhì)酶Chi60和Chi70的最適溫度和最適pH值分別為50℃和6.0。
　　3、測定了重組蛋白Chi60和Chi70對Bt HD-73的增效作用。結(jié)果表明重組幾丁質(zhì)酶Chi60的復(fù)性產(chǎn)物沒有增效作用，重組蛋白Chi70與Bt HD-73的混合制劑對棉鈴蟲2齡幼蟲的LC50顯著高于單獨使用Bt HD-73，具有增效作用。
　　4、抑菌活性的測

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