非小細(xì)胞肺癌中HDPR1與連環(huán)蛋白家族成員之間相互調(diào)控關(guān)系的研究.pdf

1、越來越多的證據(jù)表明:WNT信號通路的異常激活可以導(dǎo)致許多人類腫瘤的發(fā)生。Dishevelled(DVL)是WNT信號通路中關(guān)鍵性的正向調(diào)控因子。最近有一項在爪蟾體內(nèi)的研究分離并鑒定出一個新的Dvl相關(guān)蛋白Dapper(Dpr),其可與Dvl發(fā)生物理性結(jié)合并可拮抗Dvl的分子功能。然而,關(guān)于Dpr在WNT信號通路中的作用學(xué)術(shù)界尚存在爭議。有學(xué)者認(rèn)為Dpr能夠抑制經(jīng)典WNT/β-catenin和非經(jīng)典Wnt/JNK通路。但是也有一些學(xué)者提出

2、了與之相反的觀點,認(rèn)為Dpr能夠正向調(diào)節(jié)WNT信號通路。大量的研究證實在低等脊椎動物(如斑馬魚)和高等脊椎動物(如人類)均存在Dpr基因的表達(dá),說明它在進(jìn)化過程中高度保守,并暗示其可能具有重要的生理功能。
　　 2003年,人類DAPPER1基因(HDPR1)首次被鑒定。HDPR1是Dpr的同系物,其基因定位于人類染色體14q22.3,編碼由799個氨基酸組成的蛋白質(zhì)。有研究指出在人類星形細(xì)胞瘤中HDPR1基因缺失。此外,Tai

3、-on Yan等學(xué)者利用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)檢測了72例肝癌組織,發(fā)現(xiàn)其中31例(43％)存在HDPR1 mRNA表達(dá)下調(diào),并且HDPR1 mRNA表達(dá)下調(diào)與肝細(xì)胞癌中β-catenin的胞漿蓄積相關(guān)。我們課題組最近研究發(fā)現(xiàn):在非小細(xì)胞肺癌中普遍存在著Dvl家族蛋白的過表達(dá),并且Dvl家族蛋白的過表達(dá)與β-catenin的胞漿蓄積存在明顯的相關(guān)性。因此,我們推測:在非小細(xì)胞肺癌組織中β-catenin蛋白的胞漿異常蓄積很可能與HDPR1表達(dá)

4、下調(diào)有關(guān)。
　　 P120-catenin(p120ctn)是Armadillo蛋白亞家族的另一個重要成員,主要參與調(diào)節(jié)細(xì)胞間的粘附作用。我們課題組最近的研究證實,在肺癌組織中普遍存在著p120ctn蛋白表達(dá)下調(diào)；在肺癌細(xì)胞中敲除p120ctn的基因表達(dá)后,可以通過下調(diào)E-cadherin的表達(dá)從而促進(jìn)肺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。另外,Jae-il Park等學(xué)者通過對爪蟾胚胎發(fā)育過程的研究發(fā)現(xiàn),p120ctn蛋白的穩(wěn)定性依賴于Fro

5、do(the Xenopushomologue of Dapper)。在人類腫瘤中,HDPR1與p120ctn是否也存在某種表達(dá)調(diào)控關(guān)系?如果存在,這種調(diào)控關(guān)系的生物學(xué)意義是什么?這一問題的解決尚需要進(jìn)一步的研究。
　　 在本研究中,我們檢測了HDPR1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)情況；分析了非小細(xì)胞肺癌患者HDPR1的表達(dá)與各臨床病理因素以及預(yù)后的關(guān)系；此外,我們還利用RNA干擾技術(shù)“沉默”HDPR1的基因表達(dá)后,初步探討了其對p1

6、20ctn和β-catenin的表達(dá)以及對肺癌細(xì)胞侵襲能力的影響。
　　 材料與方法：
　　 收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科1998～2006年具有完整隨訪資料的原發(fā)性肺癌患者手術(shù)切除標(biāo)本存檔蠟塊120例(另收集距肺癌組織5cm的周圍正常肺組織30例)。120例原發(fā)肺癌患者中,男性63例,女性57例,男女性別比為:1.1:1。手術(shù)切除時患者年齡33～76歲(中位年齡57歲)。按WHO(2004)組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn):鱗狀細(xì)

7、胞癌55例,腺癌65例。按國際抗癌聯(lián)盟(UICC)2002年修訂的TNM分期標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ期39例,Ⅱ期25例,Ⅲ期44例,Ⅳ期12例。所有患者術(shù)前均未接受過放、化療。另外,收集42例新鮮的肺癌組織以及配對的正常肺組織,快速冷凍于-70℃環(huán)境中,用于將來的mRNA和蛋白檢測。
　　 我們采用免疫組化S-P法檢測了上述120例非小細(xì)胞肺癌石蠟標(biāo)本和42例新鮮組織標(biāo)本中HDPR1的表達(dá),并運用相應(yīng)的統(tǒng)計學(xué)方法分析了HDPR1的表達(dá)與各臨床

8、病理因素之間的相關(guān)性,以及HDPR1、β-catenin和p120ctn三者之間的表達(dá)關(guān)系。此外,在HDPR1表達(dá)水平較高的LM7肺癌細(xì)胞系中,我們利用RNAi技術(shù)“沉默”HDPR1的基因表達(dá),觀察其對β-catenin和p120ctn表達(dá)水平及對肺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　 結(jié)果：
　　 HDPR1在正常肺組織中為正常(高)表達(dá),而在非小細(xì)胞肺癌中有68.3％(82/120)為表達(dá)下調(diào),并且與p120ctn和β-c

9、atenin異常表達(dá)相關(guān),HDPR1表達(dá)下調(diào)與肺癌高TNM分期、低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后顯著相關(guān)。42例新鮮肺癌組織中,HDPR1和p120ctn的蛋白和mRNA均較癌旁正常組織顯著下調(diào)(P<0.05,n=42),然而,β-catenin蛋白在肺癌組織中卻普遍表達(dá)上調(diào)(P<0.05,n=42)?！俺聊盠H7肺癌細(xì)胞系中HDPR1表達(dá)后,伴隨p120ctn的表達(dá)下調(diào)和β-catenin的上調(diào),肺癌細(xì)胞的侵襲能力明顯增強。
　　

10、 結(jié)論：
　　 1、HDPR1在非小細(xì)胞肺癌中普遍表達(dá)下調(diào),并且與患者的低分化、高pTNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性。
　　 2、肺癌中HDPR1表達(dá)下調(diào)是影響患者預(yù)后的一個獨立危險因素。
　　 3、肺癌組織中HDPR1表達(dá)下調(diào)與β-catenin的異常表達(dá)相關(guān)；在肺癌細(xì)胞系中,干擾HDPR1的基因表達(dá)導(dǎo)致β-catenin蛋白在細(xì)胞漿內(nèi)異常蓄積。
　　 4、肺癌組織中HDPR1表達(dá)下調(diào)與p120ctn