ID1與非小細(xì)胞肺癌相關(guān)關(guān)系的研究.pdf

1、背景：
　　肺癌是當(dāng)今世界上發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，這到2030年都不會(huì)改變。肺癌的整體5年生存率只有15％。隨著世界整體環(huán)境的污染，肺癌發(fā)病率呈逐年遞增趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅著人們的生命。每年有1500萬(wàn)人被新診斷出患有肺癌，其中80%到85%為非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）包括肺鱗癌、肺腺癌以及大細(xì)胞癌等。由于肺癌早期無(wú)明顯癥狀，發(fā)病隱匿，大部分肺癌患者初步診斷時(shí)已屬晚期，即多已發(fā)生肺內(nèi)或者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，而喪失手術(shù)機(jī)會(huì)，大大降低了患

2、者的5年生存率，只有30%的患者適合手術(shù),且即便是IA期患者仍會(huì)出現(xiàn)術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。對(duì)于中晚期患者，化療和放療是主要的治療手段。而傳統(tǒng)放化療療效不理想，有效率僅有30%-40%，且副作用較多，已經(jīng)達(dá)到了平臺(tái)期。靶向藥物是近年來(lái)應(yīng)用于臨床肺癌患者的新的藥物，目前臨床應(yīng)用較多且最成熟的是第一代表皮生長(zhǎng)因子酪氨酸激酶抑制劑EGFR-TKIs(吉非替尼、厄羅替尼等)，其整體有效率為30%-40%，PFS時(shí)間為12個(gè)月。如何延長(zhǎng)PFS時(shí)間，即探索

3、新的耐藥機(jī)制，克服靶向藥耐藥，是我們所面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。因此，尋找一種新的與肺癌耐藥相關(guān)的預(yù)后因子勢(shì)在必行。
　　ID蛋白,又稱為DNA結(jié)合/分化抑制因子(Inhibitor of DNA binding/differentiation),從屬于bHLH轉(zhuǎn)錄因子家族，包括ID1, ID2, ID3, ID4四種分子，其中ID1的研究最為廣泛。ID1在成體組織和細(xì)胞中幾乎不表達(dá),但有研究報(bào)道ID1在多種腫瘤中高表達(dá),并且參與了細(xì)胞的異

4、常增殖、細(xì)胞周期進(jìn)展、分化抑制、基因組不穩(wěn)定等多個(gè)環(huán)節(jié)。因此ID1作為一個(gè)候選的熱點(diǎn)癌基因逐步被人們認(rèn)識(shí)。本文通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)來(lái)闡述ID1與NSCLC之間的關(guān)系。
　　目的：
　　通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及臨床標(biāo)本的檢測(cè)來(lái)闡述ID1在NSCLC中的表達(dá)、ID1與非小細(xì)胞肺癌耐藥之間關(guān)系及ID1與NSCLC預(yù)后的相關(guān)性。
　　方法：
　　1.實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR（qRT-PCR）方法檢測(cè)在肺腺癌癌細(xì)胞株（H522、H1975

5、、A549、PC-9、PC-9R）中ID1的表達(dá)量。
　　2.隨機(jī)獲取20例早期NSCLC患者術(shù)后標(biāo)本（性別、年齡、分期等無(wú)任何特殊要求），qRT-PCR方法分析在肺癌組織和癌旁組織中ID1 mRNA的表達(dá)，免疫組化方法檢測(cè)ID1蛋白在肺癌組織和癌旁組織中的表達(dá)量。
　　3.qRT-PCR技術(shù)分析PC-9敏感細(xì)胞株與PC-9/R耐藥細(xì)胞株中ID1 mRNA的表達(dá)量。
　　4.構(gòu)建ID1 siRNA慢病毒載體及ID1過(guò)表

6、達(dá)慢病毒載體，慢病毒載體轉(zhuǎn)染PC-9與PC-9/R細(xì)胞。不同濃度吉非替尼處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，MTT方法檢測(cè)細(xì)胞增殖。
　　5.取54例臨床NSCLC患者的手術(shù)標(biāo)本，免疫組化方法檢測(cè)癌組織與癌旁組織ID1的表達(dá)，分析ID1表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)ID1在肺腺癌癌細(xì)胞株（H522、H1975、A549、PC-9、PC-9R）中均高表達(dá)。
　　2.免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)肺癌組織標(biāo)本ID1蛋白比癌旁組

7、織ID1蛋白表達(dá)量高。
　　3.qRT-PCR方法發(fā)現(xiàn)ID1mRNA的表達(dá)量在PC-9R耐藥細(xì)胞中比在PC-9敏感細(xì)胞中高表達(dá)。
　　4.MTT檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PC-9細(xì)胞感染ID1過(guò)表達(dá)慢病毒后，對(duì)吉非替尼的IC50值有一定程度的上升，即耐藥性增加。PC-9/R細(xì)胞感染ID1干擾慢病毒后，對(duì)吉非替尼的IC50值有一定程度的下降，即對(duì)靶向藥物敏感性增加。
　　5.臨床標(biāo)本檢測(cè)證實(shí)ID1與NSCLC的預(yù)后具有一定相關(guān)性。

8、　　6.肺腺癌組織中ID1的表達(dá)量高于肺鱗癌組織中ID1的表達(dá)量。
　　結(jié)論：
　　1.ID1在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)。
　　2.ID1與非小細(xì)胞肺癌EGFR-TKI耐藥相關(guān)：ID1表達(dá)量與非小細(xì)胞肺癌EGFR-TKI耐藥性呈正相關(guān)，即ID1表達(dá)量越高，細(xì)胞對(duì)EGFR-TKI耐藥性越強(qiáng)，ID1表達(dá)量越低，細(xì)胞對(duì)EGFR-TKI敏感性越強(qiáng)。
　　3.ID1與非小細(xì)胞肺癌預(yù)后相關(guān)：ID1表達(dá)量與非小細(xì)胞肺癌預(yù)后呈負(fù)相關(guān)