環(huán)氧化酶-2在肝細胞肝癌中的表達及與多藥耐藥的相關(guān)性研究.pdf

1、環(huán)氧化酶(cyclooxygenase，COX)又稱前列腺素過氧化物合成酶，是催化花生四烯酸合成內(nèi)源性前列腺素的限速酶，包括3種同分異構(gòu)體。環(huán)氧化酶一2(cyclooxygenase-2，COX-2)是環(huán)氧化酶的誘導(dǎo)型，參與多種病理生理過程。近年研究發(fā)現(xiàn)COX-2本身及其催化生成的炎性介質(zhì)在多種腫瘤細胞中高表達并在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的生物學作用，因而成為國內(nèi)外研究的熱點，COX-2特異性抑制劑用來預(yù)防和治療某些腫瘤

2、尤其是胃腸道腫瘤已取得初步療效。 腫瘤的多藥耐藥性是目前腫瘤化療過程中療效不佳的主要原因，P一糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)是多藥耐藥基因一1(multidrugresistance一1,MDRl)的產(chǎn)物，P-gp／MDRl是目前公認的介導(dǎo)腫瘤多藥耐藥的主要機制之一，也是目前研究最為廣泛和深入并在臨床實踐中得到證實的耐藥機制。 新近研究發(fā)現(xiàn)COX-2參與腫瘤的多藥耐藥(multidrugresistan

3、ce，MDR)，COX-2與MDRl的關(guān)系在許多學者的研究中均得到證實：在研究卵巢癌患者中發(fā)現(xiàn)COX-2的表達與P-gp高表達顯著相關(guān),32與預(yù)后有密切關(guān)系[1]。Zimann[2]等在小鼠肝癌細胞培養(yǎng)中，加入COX-2的底物花生四烯酸及內(nèi)皮生長因子，可刺激COX-2的活性升高從而產(chǎn)生前列腺素E2(ProstaglandinE2，PGE2)，并檢測到細胞中MDRl表達顯著升高，從而推測COX-2與MDRl存在某種聯(lián)系，COX-2活性改變

4、可能調(diào)控MDRl的表達。目前關(guān)于COX-2在人肝細胞癌(Hepaticcellularcancer，HCC)組織中的表達與HCC多藥耐藥的關(guān)系尚未見報道，通過我們的實驗，擬為今后的動物和臨床研究提供可行性和相應(yīng)的理論依據(jù)。 目的：從分子生物學水平檢測COX-2蛋白及相關(guān)基因在人HCC組織、癌旁組織及正常肝臟組織中的表達，分析COX-2及COX-2mRNA與肝細胞癌臨床病理特征的關(guān)系及COX-2與P-gp在HCC組織中表達的相關(guān)性

5、，探討COX-2在肝細胞癌發(fā)生、發(fā)展中的作用以及COX-2對P-gp表達的影響。 方法：選擇我院2003年10月～2005年6月手術(shù)切除經(jīng)病理切片證實的52例HCC標本為研究對象，應(yīng)用免疫組化方法，逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)法(Reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR)分別對52例HCC組織，相應(yīng)的癌旁組織及10例正常肝組織中COX-2蛋白及COX-2mRNA的表達進行定性和半

6、定量研究，結(jié)合肝癌的分化程度、TNM分期、腫瘤大小、AFP水平、HBsAg、有無肝硬化等分析COX-2及COX-2mRNA在HCC組織中的表達特征。同時檢測P-gp蛋白及MDRlmRNA在HCC組織中的表達情況，并分析COX-2與P-gp及相關(guān)基因表達的相互關(guān)系。 結(jié)果：1免疫組化顯示：(1)正常肝組織中未見COX-2表達，在HCC組織中COX-2蛋白表達陽性率明顯高于癌旁組織(P<0．01)。 (2)低分化及分化較差的

7、HCC組織CO~-2表達陽性率明顯高于高分化HCC組織(P<0．01)；HBsAg陽性HCC組織中COX-2表達率顯著高于HBsAg陰性HCC組織，兩者比較(P<0．05)；并發(fā)肝硬化的HCC組織中COX-2的表達率顯著高于不并發(fā)肝硬化HCC組織，兩者比較(P<0．01)。在不同TNM分期、腫瘤大小、AFP水平、有無轉(zhuǎn)移之間COX-2的表達無顯著性差別(P>0．05)。2RT-PCR半定量分析結(jié)果表明：(DCOX-2mRNA在正常肝組織

8、中不表達、在癌組織和癌旁組織中的相對表達量分別為(O．724~0．050)和(O．420~0．068)，兩者比較有顯著性差別(P<0．01)。(2)低分化及分化較差的HCC組織(0．762~0．041)明顯高于高分化HCC組織(O．698~0．044)(P<0．01)；HBsAg陽性HCC組織中COX-2mRNA的相對表達量(0．756±0．042)明顯高于HBsAg陰性HCC組織COX-2mRNA的相對表達量(0．701±0．038)

9、，兩者比較(P<0．05)；合并肝硬化的HCC組織中COX-2mRNA的相對表達量(0．790±0．022)顯著高于不并發(fā)肝硬化HCC組織的COX-2mRNA相對表達量(0．636±0．0280．486~0．028)(P<0．01)。在不同TNM分期、腫瘤大小、AFP水平、有無轉(zhuǎn)移的HCC之間COX-2mRNA相對表達量無顯著性差別(P>0．05)。339例HCC組織標本免疫組化染色P-gp蛋白呈陽性表達，明顯高于癌旁組織及正常組織中P

10、-gp的表達率；45例標本RT-PCR擴增出MDRlmRNA陽性條帶；且分化越差的HCC組織P-gp／MDRlmRNA表達得更明顯和強烈。4分析顯示，COX-2陽性的HCC組織中P-gp同時表達陽性率為83．7％(36／43)，而COX-2陰性的HCC中P-gp同時陰性率為66．7％(6／9)，兩者的表達特征具有明顯的一致性；。在44例有COX-2基因擴增的HCC組織中同時有MDRl基因擴增的為42例，將兩者的相對表達量作直線相關(guān)分析具

11、有明顯相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=0．563(P<0．01)，從基因水平進一步說明了兩者在HCC組織中的表達明顯相關(guān)，其結(jié)果與免疫組化一致。 結(jié)論： (1)COX-2高表達參與了肝癌的發(fā)生、發(fā)展，其表達水平與肝細胞癌的分化程度及是否合并乙肝及肝硬化有關(guān)，與HCC組織的TNM分期、腫瘤大小、AFP水平、大體類型及是否轉(zhuǎn)移等無明顯關(guān)系。 (2)原發(fā)性肝細胞癌存在較高比例的內(nèi)在耐藥性，檢測MDR-1mRNA可以作為臨床判斷多藥

12、耐藥的指標，對臨床選擇化療方案和判斷預(yù)后有參考價值。 (3)COX-2與P-gp在肝細胞癌中的表達密切相關(guān)，COX-2可能干預(yù)P-gp的表達從而參與肝癌的多藥耐藥過程。 (4)COX-2抑制劑有望為預(yù)防HCC的發(fā)生、發(fā)展及逆轉(zhuǎn)肝癌的多藥耐藥提供一條新的途徑。 環(huán)氧化酶-2(COX-2)是環(huán)氧化酶的誘導(dǎo)型，是催化花生四烯酸合成內(nèi)源性前列腺素的限速酶。COX-2在肝癌等多種腫瘤中發(fā)揮著重要作用，促進肝癌細胞的生長、抑制