α-鵝膏毒肽抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察α-鵝膏毒肽(α-amanitin)體外對(duì)乙型肝炎病毒(HBV)的作用，為研究其在體內(nèi)對(duì)乙型肝炎病毒復(fù)制的抑制作用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)． 方法：采用HBV DNA永久轉(zhuǎn)染的肝癌細(xì)胞系HepG2．2.15為體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，?jīng)MTT法檢測(cè)出α-鵝膏毒肽對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞生長(zhǎng)無抑制作用的藥物安全濃度后，將不同安全濃度的α-鵝膏毒肽作用于該細(xì)胞系，并設(shè)置空白和陽性對(duì)照，以及溶酶對(duì)照組，72小時(shí)更換相同濃度新鮮含藥培養(yǎng)基，并于72

2、和144小時(shí)后收集培養(yǎng)上清液，并采用時(shí)間分辨免疫熒光分析法檢測(cè)其HBsAg和HBeAg水平，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)其上清HBV DNA水平． 結(jié)果：(1)經(jīng)過α-鵝膏毒肽對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞的毒性測(cè)試，得出第三天和第六天的半數(shù)有毒濃度(TC<,50>)分別為10.19和8.47μg/ml，而在0.8μg/ml濃度以下對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無影響；(2)72h 0.8、0.16μg/mlα-鵝膏毒肽濃度組和陽性對(duì)照組對(duì)HBsAg

3、抑制率分別為19.88％、15.95％和46.07％，其余各組未見抑制作用；144h 0.8、0.16μg/mlα-鵝膏毒肽濃度組和陽性對(duì)照組對(duì)HBsAg抑制率分別為47.40％、29.30％和55.71％，其余各組未見抑制作用；(3)72h 0.8μg/mlα-鵝膏毒肽濃度組和陽性對(duì)照組對(duì)HBeAg抑制率分別為14.16％和31.86％，其余各組未見抑制作用。144h 0.8、0.16和0.032μg/mlα-鵝膏毒肽濃度組和陽性對(duì)照

4、組對(duì)HBeAg抑制率分別51.52％、45.84％、29.09％和59.14％。0.0064μg/mlα-鵝膏毒肽組未見抑制作用。(4)72h 0.8、0.16μg/mlα-鵝膏毒肽濃度組和陽性對(duì)照組對(duì)HBV DNA抑制率分別為29.25％、21.96％和33.30％，其余各組未見抑制作用。1.44h 0.8、0.16、0.032μg/mlα-鵝膏毒肽濃度組和陽性對(duì)照組對(duì)HBV DNA抑制率分別為51.74％、42.12％、34.29％

5、和48.20％。其余各組未見抑制作用。 結(jié)論：(1)α-鵝膏毒肽對(duì)HepG 2.2.15細(xì)胞有一定毒性，第三天和第六天的半數(shù)毒性濃度(TC<,50>)分別為10.19和8.47μg/mlα-，但在0.8μg/ml及其以下濃度α-鵝膏毒肽對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無影響；(2)α-鵝膏毒肽在0.8μg/ml以下的一定濃度范圍內(nèi)在HepG2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)中可有效抑制細(xì)胞HBsAg、HBeAg和HBV DNA的分泌，且在一定濃度范圍內(nèi)隨著時(shí)間的延