MMP-28與椎間盤(pán)退變關(guān)系的研究.pdf

1、目的：椎間盤(pán)退變的原因很多，基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinasesMMPs)表達(dá)量增加被認(rèn)為是導(dǎo)致椎間盤(pán)退交的主要機(jī)制之一。有關(guān)MMPs與椎間盤(pán)退變之間的關(guān)系一直是研究熱點(diǎn)，然而MMPs家族的最新成員MMP-28與椎間盤(pán)退變的關(guān)系國(guó)內(nèi)外卻鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)MMP-28在正常與不同退變等級(jí)的椎間盤(pán)中的表達(dá)，研究MMP-28與椎間盤(pán)退變的關(guān)系。研究表明細(xì)胞因子如IL-1β、TNF-α參與椎間盤(pán)退變，且可以調(diào)

2、控MMPs表達(dá)，本實(shí)驗(yàn)將體外培養(yǎng)的人體髓核細(xì)胞與IL-1β、TNF-α共培養(yǎng)，檢測(cè)MMP-28mRNA轉(zhuǎn)錄水平，探討IL-1β、TNF-α對(duì)髓核細(xì)胞的MMP-28是否具有調(diào)控作用。
　　方法：收集2012年4月-2012年12月期間在徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院手術(shù)的腰椎間盤(pán)突出癥患者的髓核標(biāo)本30例為退變組，同期手術(shù)的胸腰段骨折患者的髓核標(biāo)本10例為對(duì)照組，將標(biāo)本根據(jù)Pfirrman分級(jí)分為五級(jí)，按突出程度分為突出型和脫出型，應(yīng)用免疫組織

3、化學(xué)染色法檢測(cè)髓核標(biāo)本中MMP-28的表達(dá)，記錄染色陽(yáng)性率并進(jìn)行分級(jí)，采用等級(jí)秩和檢驗(yàn)、Mann-Whitney U法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，同時(shí)采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法分析椎間盤(pán)退變等級(jí)與MMP-28表達(dá)強(qiáng)度的相關(guān)性。應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)髓核組織MMP28mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，并采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析比較退變組和對(duì)照組、突出組和脫出組中轉(zhuǎn)錄水平的差異。培養(yǎng)人體正常髓核細(xì)胞，將三個(gè)不同濃度的IL-1β(0ng/ml、10ng/ml、5

4、0ng/ml)和三個(gè)不同濃度的TNF-α(0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)分別與體外擴(kuò)增的第三代髓核細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)72h，RT-PCR法測(cè)定MMP-28mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，采用單因素方差分析法比較轉(zhuǎn)錄水平的差異。
　　結(jié)果：30例退變髓核組織中有26例檢測(cè)到MMP-28表達(dá)，陽(yáng)性率等級(jí)分布為（-）4例、(+)5例、(++)7例、（+++）8例、（++++）6例，10例對(duì)照組中僅有2例檢測(cè)到MMP-28表達(dá)，陽(yáng)性率等級(jí)

5、分布為（-）8例、(+)1例、(++)1例，MMP-28在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。椎間盤(pán)退變等級(jí)分布為:Ⅱ級(jí)6例、Ⅲ級(jí)9例、Ⅳ級(jí)8例、Ⅴ級(jí)7例，MMP-28表達(dá)與椎間盤(pán)退變等級(jí)呈中度正相關(guān)(rs=0.670，P＜0.01)。15例突出髓核組織中有12例檢測(cè)到MMP-28表達(dá)，陽(yáng)性率等級(jí)分布為（-）3例、(+)4例、(++)4例、（+++）3例、(++++)1例，15例脫出髓核組織中有14例檢測(cè)到MMP-2

6、8表達(dá)，陽(yáng)性率等級(jí)分布為（-）1例、(+)1例、(++)3例、（+++）5例、（++++）5例，MMP-28在突出組和脫出組中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。退變組mRNA轉(zhuǎn)錄水平(0.627±0.125)較對(duì)照組(0.401±0.065)顯著升高，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)脫出組MMP-28mRNA轉(zhuǎn)錄水平(0.698±0.988)較突出組(0.556±0.108)顯著升高，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0

7、.01)。
　　不同濃度(0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml)的IL-1β與髓核細(xì)胞共培養(yǎng)72小時(shí)后，各組間MMP-28mRNA轉(zhuǎn)錄水平(0.325±0.019、0.343±0.018、0.343±0.018)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。不同濃度(0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml) TNF-α與髓核細(xì)胞共培養(yǎng)72小時(shí)后，各組間MMP-28mRNA轉(zhuǎn)錄水平(0.325±0.019、0.515±0.02、0.